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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » gst标签，蛋白纯化
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hooroberts

新虫 (小有名气)

[求助] gst标签，蛋白纯化

大家看看我这目的蛋白，在上清中纯化有希望吗，gst标签的，整了几次没出来，放好久了，如果不行的话是不是纯化包涵体也行，gst的是不是变性后腰先复性再纯化，如果复性的话怎么复性？做酶活的，对量不要求多大。
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1楼2011-06-27 22:55:24
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落明逐暗

金虫 (正式写手)

好吃嘴班班长
★ ★
silicare(金币+2): 谢谢参与 2011-06-30 15:14:56
个人感觉16℃有点低了吧。。。温度低了也不利于细菌生长和蛋白表达的啊。而且载体不同，搭载的蛋白不同，对温度要求也不同。30度还嫌高的话，28度可以尝试。IPTG我以前用的是0.3mmol。
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天涯静处无征战，兵气销为日月光。
6楼2011-06-30 10:04:13
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693137546

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

建议楼主不要做包涵体呀
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大风气息云飞扬
2楼2011-06-27 23:08:46
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hooroberts

新虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 693137546 at 2011-06-27 23:08:46:
建议楼主不要做包涵体呀

不到必要时我也不想
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3楼2011-06-28 21:48:29
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落明逐暗

金虫 (正式写手)

好吃嘴班班长

【答案】应助回帖

hooroberts(金币+2): 试过，16度，0.15mmol，24小时，没效果。 2011-06-29 23:51:13
建议楼主降低发酵温度和转速，延长发酵时间，这样应该会提高在上清中的表达量。30℃，200rpm，6-7小时应该不错。之后再进行纯化就能有合适的上样量。不然上样量太低也没有好的纯化效果。光凭图的话，真的量太少了。
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天涯静处无征战，兵气销为日月光。
4楼2011-06-29 10:05:54
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