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大风吹

银虫 (小有名气)

[求助] GST蛋白纯化柱子

我们实验室做GST-pull down纯化蛋白时用的柱子 现在有点发黄 而且表面有明显的肉眼可见黑色杂质 我承认之前纯化时细菌裂解液没有过滤 现在这柱子还能不能用啊 已经用过数次了 可是没有新的可换 想再用看着颜色发黄 又很忐忑
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1楼2013-06-12 15:26:57
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kx444555

至尊木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
大风吹: 金币+20, ★★★很有帮助 2013-06-19 08:55:08
用20%酒精段时间，不追求载量的话，可以用，
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星陈代谢
2楼2013-06-12 20:59:06
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大风吹

银虫 (小有名气)
我就是用20%乙醇保存的离上次用有好几个月了 柱子还是黄 杂质还是在 载量 你是说挂柱的量是吗 是说这样的柱子最终能结合的蛋白很少吗 谢谢
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3楼2013-06-13 09:39:46
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kx444555

至尊木虫 (正式写手)
★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-06-19 10:58:51
是的，载量会变少的，有很多基质被氧化或者细菌污染了，导致不再具有结合蛋白的能力
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星陈代谢
4楼2013-06-19 09:02:37
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yuesisij

新虫 (初入文坛)
我也准备做pull-down实验，我想请问一下你们用的是什么柱子，能否给分享一下做pull-down的心得！谢谢！
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5楼2013-07-18 15:35:42
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大风吹

银虫 (小有名气)
用的是GST的柱子，是以前师兄师姐留下来的，很简陋的一个塑料管里面装的GST珠子，其他还好，就是纯化蛋白太麻烦了，我们的条件很简陋，一切都是我手动操作，很累。操作过程中也没什么特别的，主要就是整个过程中所用溶液pH调准点，不然会影响蛋白与柱子的结合、洗脱等。
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6楼2013-07-19 08:48:53
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hyuqing

捐助贵宾 (小有名气)

Enriching beads
要不然换个GST磁珠试试，成本差不多，但是操作就简单很多，直接磁性分离就可以了
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7楼2015-01-03 17:23:11
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