| 查看: 2945 | 回复: 25 | |||
| 本帖产生 1 个 BioEPI ，点击这里进行查看 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
hooroberts新虫 (小有名气)
|
[求助]
gst标签，蛋白纯化
|
||
大家看看我这目的蛋白，在上清中纯化有希望吗，gst标签的，整了几次没出来，放好久了 ，如果不行的话是不是纯化包涵体也行，gst的是不是变性后腰先复性再纯化，如果复性的话怎么复性？做酶活的，对量不要求多大。  |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 蛋白质生物学实验经验 |
» 猜你喜欢
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
高表达蛋白纯化手册QIAGEN
已经有100人回复
- GST蛋白纯化柱子
已经有6人回复
- 求助GST纯化，凝血酶酶切！谢谢
已经有6人回复
- 求助！关于GST融合蛋白纯化！楼主愁得一夜没有睡好！
已经有20人回复
- 做GST纯化beads离心转速高了？怎么办？
已经有4人回复
- 蛋白纯化标签有哪些?
已经有6人回复
- His标签的蛋白纯化柱子
已经有10人回复
- 带HIS标签的可溶蛋白的纯化问题
已经有20人回复
- 关于E-tag标记蛋白的纯化问题！~求助，谢谢帮忙~！
已经有9人回复
- 带GST标签的融合蛋白的纯化问题——急急急
已经有4人回复
- GST柱纯化蛋白 是否变性
已经有6人回复
- 如何在蛋白纯化后去除6组氨酸(6His)标签
已经有17人回复
- 组氨酸标记蛋白的纯化
已经有6人回复
- gst标签蛋白的表达和纯化
已经有17人回复
- GST标签 pGEX
已经有7人回复
- GST蛋白纯化柱 说明书中文版
已经有4人回复
- 蛋白互作必会，GST纯化遇到的问题
已经有13人回复
- 想给自己的蛋白加个HIS标签？方法。。。。
已经有8人回复
- his标签蛋白纯化，不挂柱
已经有18人回复
- GST融合蛋白纯化求助 ！！！
已经有19人回复
- 【求助/交流】带GST标签的重组蛋白的纯化？
已经有14人回复
落明逐暗
金虫 (正式写手)
好吃嘴班班长
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 13196.2
- 散金: 4
- 帖子: 421
- 在线: 99.7小时
- 虫号: 742854
- 注册: 2009-04-08
- 性别: MM
- 专业: 微生物与生化药学
4楼2011-06-29 10:05:54
2楼2011-06-27 23:08:46
hooroberts
新虫 (小有名气)
- BioEPI: 3
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: -17.9
- 红花: 1
- 帖子: 52
- 在线: 10.8小时
- 虫号: 1331780
- 注册: 2011-06-26
3楼2011-06-28 21:48:29
zsy1106
金虫 (小有名气)
- BioEPI: 13
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 742.8
- 散金: 216
- 红花: 10
- 帖子: 112
- 在线: 81.6小时
- 虫号: 1279670
- 注册: 2011-04-27
- 性别: MM
- 专业: 生物化学
【答案】应助回帖
hooroberts(金币+8): 妹子威武！！哎，不过还是感觉希望不大，能直接用上清做阴性对照做酶活吗? 2011-06-29 23:48:31
silicare(EPI+1): 2011-06-30 15:14:42
silicare(EPI+1): 2011-06-30 15:14:42
|
1、上清纯化当然有希望了，GST标签特异性很好的，楼主不要嫌量少，纯化时GST介质不要装太多，纯化完后会有浓缩效果。 2、尽管GST是亲水蛋白，融合以后这么大的分子量还想上清表达量大，基本不可能。 3、纯化包涵体还是不推荐，GST标签的结合是和GST的构象相关的，包涵体纯化就肯定要做复性，而且你的复性条件既要保证GST的构象回复正常（这点做不到标签不能用来纯化），还要保证你的目的蛋白构象回复正常（这点做不到你的蛋白没活性）。 4、如果非要做包涵体，His标签优于gst，你完全可以在变性条件（尿素中）下纯化，纯化完再做复性。 5、复性就是通过稀释或透析把尿素等变性剂一次性或逐步除去，让蛋白逐渐恢复天然构象，以可溶状态出现的过程，具体条件不同的蛋白是不一样的，要自己去摸索。一般就是缓冲液啊，盐浓度之类的。 |
5楼2011-06-29 20:08:12
