24小时热门版块排行榜

返回列表

本帖产生 1 个 BioEPI ，点击这里进行查看

当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

hooroberts

新虫 (小有名气)

BioEPI: 3
应助: 0 (幼儿园)
金币: -17.9
红花: 1
帖子: 52
在线: 10.8小时
虫号: 1331780
注册: 2011-06-26

[求助] gst标签，蛋白纯化

大家看看我这目的蛋白，在上清中纯化有希望吗，gst标签的，整了几次没出来，放好久了

，如果不行的话是不是纯化包涵体也行，gst的是不是变性后腰先复性再纯化，如果复性的话怎么复性？做酶活的，对量不要求多大。

回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

蛋白质生物学实验经验

» 猜你喜欢

孩子确诊有中度注意力缺陷已经有14人回复
三甲基碘化亚砜的氧化反应已经有4人回复
请问下大家为什么这个铃木偶联几乎不反应呢已经有5人回复
请问有评职称，把科研教学业绩算分排序的高校吗已经有5人回复
2025冷门绝学什么时候出结果已经有3人回复
天津工业大学郑柳春团队欢迎化学化工、高分子化学或有机合成方向的博士生和硕士生加入已经有4人回复
康复大学泰山学者周祺惠团队招收博士研究生已经有6人回复
AI论文写作工具：是科研加速器还是学术作弊器？已经有3人回复
论文投稿，期刊推荐已经有4人回复
请问2026国家基金面上项目会启动申2停1吗已经有5人回复

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

1楼2011-06-27 22:55:24

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

zsy1106

金虫 (小有名气)

BioEPI: 13
应助: 0 (幼儿园)
金币: 742.8
散金: 216
红花: 10
帖子: 112
在线: 81.6小时
虫号: 1279670
注册: 2011-04-27
性别: MM
专业: 生物化学

【答案】应助回帖

hooroberts(金币+8): 妹子威武！！哎，不过还是感觉希望不大，能直接用上清做阴性对照做酶活吗? 2011-06-29 23:48:31
silicare(EPI+1): 2011-06-30 15:14:42

1、上清纯化当然有希望了，GST标签特异性很好的，楼主不要嫌量少，纯化时GST介质不要装太多，纯化完后会有浓缩效果。
2、尽管GST是亲水蛋白，融合以后这么大的分子量还想上清表达量大，基本不可能。
3、纯化包涵体还是不推荐，GST标签的结合是和GST的构象相关的，包涵体纯化就肯定要做复性，而且你的复性条件既要保证GST的构象回复正常（这点做不到标签不能用来纯化），还要保证你的目的蛋白构象回复正常（这点做不到你的蛋白没活性）。
4、如果非要做包涵体，His标签优于gst，你完全可以在变性条件（尿素中）下纯化，纯化完再做复性。
5、复性就是通过稀释或透析把尿素等变性剂一次性或逐步除去，让蛋白逐渐恢复天然构象，以可溶状态出现的过程，具体条件不同的蛋白是不一样的，要自己去摸索。一般就是缓冲液啊，盐浓度之类的。