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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】基因克隆到底目的何在？
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hqc87

铁虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】基因克隆到底目的何在？

验证一个小麦品种中是否含有一个特定基因比如植物的抗逆基因CBF4，一般的做法是根据CBF4的序列设计引物，然后以待检测小麦基因组DNA为模板进行扩增，得到条带就说明该小麦品种含有该基因，此处有一问题就是在设计引物时不一定是从基因的两端开始的对吧？比如假设CBF4完整基因是1000bp的话，而在线设计引物可能得到位于该基因内部的两个上下引物，这样用这对基因内部引物得到的pcr产物很可能只有300个bp左右，这样如果经pcr得到300bp的产物，也能说明该小麦品种含有该基因吗？得到300bp的pcr产物后将条带从胶上切下来，和载体连接转化等等，最后测序，这应该就是所谓的基因克隆吧，那最后测序的结果是不是也是那个连接上去的300bp片段的序列，得到这个300bp的序列有什么目的呢？在设计引物时就明明知道这两个上下游引物间的300bp的序列啊，所以这一切的目的是什么？小弟不才，刚步入研究阶段，可能问题比较可笑，希望各位大虾耐心解我疑惑，感激不尽！
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1楼 2011-02-18 06:48:56
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wqj1988926

金虫 (正式写手)
★
dhd997(金币+1): 感谢交流 2011-02-18 10:50:56
hqc87(金币+1): 2011-02-18 17:02:38
得到300bp片段的序列后，再根据此片段设计引物，应用商品化的试剂盒克隆3，与5，末端，从而获得全长基因序列
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2楼2011-02-18 09:01:56
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susizheng

木虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★ ★
dhd997(金币+5): 谢谢交流 2011-02-18 10:51:06
hqc87(金币+3): 正中要点，非常感谢！！ 2011-02-18 17:03:39
个人认为之所以从基因内部设计引物扩增比较小的片段，那对引物的设计不是随便设计的，应该特异性非常好，尽可能不会出现非特异性扩增，这样的鉴定才有意义。之后之所以做克隆，测序，是因为拿到序列最有说服力。
另外，选择扩增比较小的片段，克隆的时候效率会高很多，而且测序只需要一个反应，这样成本也降低很多。
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3楼2011-02-18 09:03:24
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