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napzy

新虫 (初入文坛)

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[交流] 【求助/交流】PCR没有条带已有8人参与

大家好，我是个刚做分子的新人，PCR有些还不太明白，请教大家。
最近我跑PCR，两对引物，第一对，一跑就出了目标条带，第二对跑了很多次，死活跑不出东西来。大家帮我分析下，问题可能出在哪里？
引物设计没问题，很多人都用这对引物。我按照文献的各种方法都跑了，渐变温的，恒温的。开始怀疑引物出问题了，放了很长时间了，但这两天又用新配的引物也还是跑不出来。我也试着改变DNA模板浓度跑了，也没跑出任何东西来。
老板告诉我的信息是，肯定能跑出来，我们试验室毕业了的人跑过，再就是确实不好跑出来，第一对引物比较好跑出来，第一对跑出来了但第二对引物不一定能跑出来。他的意思是不是DNA模板可能有问题？纯度不够？
大家帮我分析下，我的实验过程中可能哪些地方出了问题，该怎么解决这些问题，谢谢了！

这是第一对引物跑的图

这是第二对引物跑的，跑出应该是同第一对的差不多，都应该是300多bp的片段
（另外弱弱的问一下，最下面那条带是什么？引物？引物二聚体？）
谢谢大家了！

[ Last edited by napzy on 2010-12-16 at 18:49 ]

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1楼 2010-12-16 18:47:55

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lovenlong

铜虫 (小有名气)

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性别: GG
专业: 作物种质资源与遗传育种学

停下了，好好总结再做看看。

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流

引用回帖:

Originally posted by napzy at 2010-12-16 18:47:55:
大家好，我是个刚做分子的新人，PCR有些还不太明白，请教大家。
最近我跑PCR，两对引物，第一对，一跑就出了目标条带，第二对跑了很多次，死活跑不出东西来。大家帮我分析下，问题可能出在哪里？
引物设计没问题 ...

弱弱地问下：你第二个图那些黑斑是啥？洗完胶就这样还是咋滴？
如果你用的引物是新的，DNA能跑出第一对那也是没问题的，PCR体系也一样，那退火温度你设的多少？扩增的目的片段GC含量比例是否很高？很可能是加错东西哦。。。