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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】荧光PCR扩增曲线问题
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love_st

金虫 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】荧光PCR扩增曲线问题

我的一对引物探针，高浓度的扩增没有问题，而低浓度却扩增不好，荧光信号很低，为什么？图中那两条扩增曲线是模板浓度十倍稀释的！请大家帮我看看哦！
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1楼2010-12-08 16:59:29
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love_st

金虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by silicare at 2010-12-09 12:32:54:
什么机子什么染料（探针标记染料）啊，荧光值现实好高啊

浓度低了的时候，ct值超过30的时候都容易出现这种情况

不知你这事rn还是delta rn

貌似ct值还比较正常，你换成半对数图看看吧，那样应该更直观好看 ...

ABI7500的，染料是FAM，荧光值和模板浓度一般也是会呈现梯度下降的，这个下降的太多了，所以图形很难看，我想知道或者想讨论的是，什么因素导致低浓度的扩增效率不高，我想可能是我的引物本身的问题，那么能否改变什么条件能改善呢？
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8楼2010-12-09 12:44:35
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silicare

荣誉版主 (文坛精英)
love_st(金币+1):谢谢交流 2010-12-09 08:59:09
做了几个复孔啊， 第二条明显不对啊
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3楼2010-12-09 08:50:27
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金虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by silicare at 2010-12-09 08:50:27:
做了几个复孔啊， 第二条明显不对啊

做了很多重复，这对引物探针就是这样，高浓度的模板扩增挺好，就是低浓度的模板突然不呈梯度的荧光信号突然下降的厉害，体系优化似乎也优化不出来
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4楼2010-12-09 08:58:53
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silicare

荣誉版主 (文坛精英)
最好还是多些数据，两条线不太好分析啊

[ Last edited by silicare on 2010-12-9 at 09:50 ]
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5楼2010-12-09 10:32:21
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