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【求助/交流】荧光PCR扩增曲线问题
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【求助/交流】荧光PCR扩增曲线问题
我的一对引物探针,高浓度的扩增没有问题,而低浓度却扩增不好,荧光信号很低,为什么?图中那两条扩增曲线是模板浓度十倍稀释的!请大家帮我看看哦!
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2010-12-08 16:59:29
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Originally posted by
silicare
at 2010-12-09 12:32:54:
什么机子什么染料(探针标记染料)啊,荧光值现实好高啊
浓度低了的时候,ct值超过30的时候都容易出现这种情况
不知你这事rn还是delta rn
貌似ct值还比较正常,你换成半对数图看看吧,那样应该更直观好看 ...
ABI7500的,染料是FAM,荧光值和模板浓度一般也是会呈现梯度下降的,这个下降的太多了,所以图形很难看,我想知道或者想讨论的是,什么因素导致低浓度的扩增效率不高,我想可能是我的引物本身的问题,那么能否改变什么条件能改善呢?
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2010-12-09 12:44:35
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love_st(金币+1):谢谢交流 2010-12-09 08:59:09
做了几个复孔啊, 第二条明显不对啊
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3楼
2010-12-09 08:50:27
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silicare
at 2010-12-09 08:50:27:
做了几个复孔啊, 第二条明显不对啊
做了很多重复,这对引物探针就是这样,高浓度的模板扩增挺好,就是低浓度的模板突然不呈梯度的荧光信号突然下降的厉害,体系优化似乎也优化不出来
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4楼
2010-12-09 08:58:53
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最好还是多些数据,两条线不太好分析啊
[
Last edited by silicare on 2010-12-9 at 09:50
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2010-12-09 10:32:21
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