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xuehu2008

铜虫 (正式写手)

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[交流] 【求助/交流】求助关于分子克隆中的连接问题

我做得一个基因的分子克隆，基因P出来片段大小合适，载体也没问题，两者酶切后片段大小也都合适，但不知为什么连接后转化就是长不出克隆来。感受态没有问题，效率非常高。有一次连接产物转化后板子上长出一个克隆，挑了后酶切验证发现基因片段和目的基因片段都比预期少了一两百bp。各位兄弟姐妹，有什么建议？
又及，若抗生素加大一倍，菌能长起来吗？

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1楼 2010-12-03 23:57:52

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wangleisdnu

金虫 (正式写手)

xuehu2008(金币+2):thanks a lot 2010-12-06 20:14:33

I recommend you to ligate your fragment into TOPO vector by TA cloning and sequence your fragment.
you also can check if your protection base for restriction site is enough and digestion is complete or not