应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » 求助Western大神，我的pSmad怎么跑出来是三条呢？？？蓝瘦香菇==
51/1返回列表
查看: 1580  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

Sunshine_WHL

铜虫 (小有名气)

[求助] 求助Western大神，我的pSmad怎么跑出来是三条呢？？？蓝瘦香菇==

我做成骨方向，是裂解C2C12细胞，然后用Western Blot分析细胞内pSmad1/5/8蛋白的含量。我计算了一下我跑胶的上样量大约45ug，然后按我们实验室前辈们摸索出来的经验，恒电压80V至跑出条带，然后换100V跑，整个过程大约90min。pSmad分子量大约在60kDa,我用的内参GAPDH在36kDa，于是转膜我用300mA转70min，感觉转的挺好的。接下来我用5%BSA室温封闭3h，然后加入1:1000的一抗4度孵育过夜，第二天吸出一抗用TBST洗三遍，每次5min，然后加入1：1000二抗室温孵育2h，然后用TBST洗三遍，每次5min，接下来就用ECL显色剂显色了，可是我跑了好几次感觉都不一样。。。
附件1是我上次跑的pSmad有一条，附件2是我这次跑的居然有3条。。。要哭了，有谁可以解释一下吗？

求助Western大神，我的pSmad怎么跑出来是三条呢？？？蓝瘦香菇==
1.PNG


求助Western大神，我的pSmad怎么跑出来是三条呢？？？蓝瘦香菇==-1
2.PNG
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2017-03-12 14:16:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

村太爷

金虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by Sunshine_WHL at 2017-03-12 14:41:35
可是我两次用的是同一种抗体。。。莫非是pSmad1/5/8就是有三条么
...

那就可能是蛋白降解啦

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
4楼2017-03-12 15:58:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答

村太爷

金虫 (正式写手)
抗体的问题呗

发自小木虫Android客户端
回复此楼
2楼2017-03-12 14:33:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Sunshine_WHL

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 村太爷 at 2017-03-12 14:33:10
抗体的问题呗

可是我两次用的是同一种抗体。。。莫非是pSmad1/5/8就是有三条么

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
3楼2017-03-12 14:41:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

糖糖糖糖1234

新虫 (初入文坛)
想请教一下，你这个图片在拍照之后，是用什么软件处理的？

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
5楼2017-03-22 23:23:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 Z7qfCsdIiD1T 2026-11-10 5/250 2026-11-11 18:48 by TgvkbZZl9tqB
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 czAiolzR0IJC 2026-11-10 4/200 2026-11-11 18:37 by TgvkbZZl9tqB
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 czAiolzR0IJC 2026-11-10 4/200 2026-11-11 18:20 by TgvkbZZl9tqB
[硕博家园] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 G2rhSvqvhNzl 2026-11-10 5/250 2026-11-11 17:58 by TgvkbZZl9tqB
[教师之家] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 C6CRn66RYYXS 2026-11-10 3/150 2026-11-11 17:47 by TgvkbZZl9tqB
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +5 FChKX8meu1ds 2026-11-09 7/350 2026-11-11 17:31 by TgvkbZZl9tqB
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +5 FChKX8meu1ds 2026-11-09 10/500 2026-11-11 17:25 by TgvkbZZl9tqB
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 FChKX8meu1ds 2026-11-09 6/300 2026-11-11 17:14 by TgvkbZZl9tqB
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 FChKX8meu1ds 2026-11-09 6/300 2026-11-11 17:09 by TgvkbZZl9tqB
[硕博家园] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +6 cqv1zKnzd7hr 2026-11-09 8/400 2026-11-11 17:00 by TgvkbZZl9tqB
[硕博家园] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 zSbvVX9JFl9J 2026-11-09 7/350 2026-11-11 16:41 by TgvkbZZl9tqB
[考博] 27博士 +3 锦鲤送福至 2026-11-10 3/150 2026-11-11 15:53 by 可淡不可忘
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 Z7qfCsdIiD1T 2026-11-10 4/200 2026-11-11 15:24 by TgvkbZZl9tqB
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 YHiw1gou1Eda 2026-11-10 4/200 2026-11-11 14:13 by cdqGD6ftHmbl
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 FChKX8meu1ds 2026-11-09 5/250 2026-11-11 14:02 by cdqGD6ftHmbl
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 FChKX8meu1ds 2026-11-09 7/350 2026-11-11 13:51 by cdqGD6ftHmbl
[硕博家园] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +5 0TEMgxdT1eIw 2026-11-09 7/350 2026-11-11 13:31 by cdqGD6ftHmbl
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 FChKX8meu1ds 2026-11-09 5/250 2026-11-11 10:46 by 1Nb0IVlmV6v0
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 cqv1zKnzd7hr 2026-11-09 6/300 2026-11-11 10:32 by 1Nb0IVlmV6v0
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 11/550 2026-11-06 16:10 by 5sJFDKp2kwuI
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭