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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】western blot
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wdongdong

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】western blot 已有9人参与

本人最近在做western blot，2抗孵育并洗涤后，加入了ECL HRP底物后，能立刻看到目的条带，但压片后始终看不到目的带，胶片上什么都没有，整个压片系统是没有问题的，我不知道出了什么问题？
   用的碧云天的HIS抗体，条带大小也差不多，怎么在胶片上没任何信号了？
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1楼 2010-06-30 19:05:48
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dianaofyezi

金虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+1):谢谢交流。 2010-07-01 08:36:54
不知道你做了其他对比试验么？比方说其他同学是否也出现这样的问题呢？
另外你的显色液是否放置时间太长，保存是否合适导致了荧光时间变短，所以压片的时候信号不强了？
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52187644
2楼2010-06-30 22:39:44
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+1):谢谢交流。 2010-07-01 08:36:46
你先把你的胶片拿出来见光死，然后显影定影看看有没有先~~确保试剂没有变质
我就遇到过一次试剂变质而做不出来
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3楼2010-06-30 23:13:52
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张力民1598

铜虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
同意楼上的说法，有时候就是显影剂不好用
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4楼2010-07-01 08:53:49
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zsxnd

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-06-30 23:13:52:
你先把你的胶片拿出来见光死，然后显影定影看看有没有先~~确保试剂没有变质
我就遇到过一次试剂变质而做不出来

正解
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5楼2010-07-01 09:29:14
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jiahaitao1016

金虫 (小有名气)
★ ★
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dhd997(金币+1):谢谢交流。 2010-07-01 10:48:45
1. 可能是显影液有问题，或者显影液显影效果不好了，适当延长显影时间。
2. 荧光淬灭太快，在你压胶片前就已经淬灭了，所以胶片感光不到。压片动作迅速一点。
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6楼2010-07-01 10:45:00
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zx314

金虫 (职业作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
你把二抗稀释1：8000试试，我遇到过，二抗太浓了。很快消耗了ECL
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7楼2010-07-29 15:06:47
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seahow

木虫 (著名写手)
一定是 显影液的问题，错了包换；
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8楼2010-07-29 15:10:56
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玛格丽特的

铁虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
肯定是显影液定影液的问题，有时候放个两三周就坏了
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9楼2018-05-25 11:04:07
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wspvi

至尊木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
二抗稀释试试，二抗太高，很快消耗了ECL
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10楼2018-05-25 11:08:50
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