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wdongdong

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】western blot 已有9人参与

本人最近在做western blot,2抗孵育并洗涤后,加入了ECL HRP底物后,能立刻看到目的条带,但压片后始终看不到目的带,胶片上什么都没有,整个压片系统是没有问题的,我不知道出了什么问题?
   用的碧云天的HIS抗体,条带大小也差不多,怎么在胶片上没任何信号了?
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dianaofyezi

金虫 (正式写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
dhd997(金币+1):谢谢交流。 2010-07-01 08:36:54
不知道你做了其他对比试验么?比方说其他同学是否也出现这样的问题呢?
另外你的显色液是否放置时间太长,保存是否合适导致了荧光时间变短,所以压片的时候信号不强了?
52187644
2楼2010-06-30 22:39:44
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
dhd997(金币+1):谢谢交流。 2010-07-01 08:36:46
你先把你的胶片拿出来见光死,然后显影定影看看有没有先~~确保试剂没有变质
我就遇到过一次试剂变质而做不出来
3楼2010-06-30 23:13:52
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张力民1598

铜虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
同意楼上的说法,有时候就是显影剂不好用
4楼2010-07-01 08:53:49
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zsxnd

铁杆木虫 (著名写手)

引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-06-30 23:13:52:
你先把你的胶片拿出来见光死,然后显影定影看看有没有先~~确保试剂没有变质
我就遇到过一次试剂变质而做不出来

正解
5楼2010-07-01 09:29:14
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jiahaitao1016

金虫 (小有名气)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
dhd997(金币+1):谢谢交流。 2010-07-01 10:48:45
1. 可能是显影液有问题,或者显影液显影效果不好了,适当延长显影时间。
2. 荧光淬灭太快,在你压胶片前就已经淬灭了,所以胶片感光不到。压片动作迅速一点。
6楼2010-07-01 10:45:00
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zx314

金虫 (职业作家)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
你把二抗稀释1:8000试试,我遇到过,二抗太浓了。很快消耗了ECL
7楼2010-07-29 15:06:47
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seahow

木虫 (著名写手)

一定是 显影液的问题,错了包换;
8楼2010-07-29 15:10:56
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玛格丽特的

铁虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
肯定是显影液定影液的问题,有时候放个两三周就坏了
9楼2018-05-25 11:04:07
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wspvi

至尊木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
二抗稀释试试,二抗太高,很快消耗了ECL
10楼2018-05-25 11:08:50
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