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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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wuwenmei

新虫 (小有名气)

[求助] 求助关于Western blot. 已有2人参与

假如我要分离的两个蛋白质大小分为14KD和12KD,由于相差比较近,我可不可以通过调浓缩胶和分离胶的浓度来分离呀,使他们跑的开一点,有没有大神能解决呀哈,谢谢
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下雨天就算没有伞,我也要学会努力奔跑!
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基础

新虫 (著名写手)

没跑过这么近的啊,可以用抗体去除液试试

[ 发自小木虫客户端 ]
2楼2014-12-15 09:09:53
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wuwenmei

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 基础 at 2014-12-15 09:09:53
没跑过这么近的啊,可以用抗体去除液试试

我是研一的,做过两次都只出现的一条带哦,就是跑不开,你说的抗体去除液我不怎么懂,能详细解释下吗?谢谢啊
下雨天就算没有伞,我也要学会努力奔跑!
3楼2014-12-15 09:35:11
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秋雨晗晨

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2014-12-15 18:32:04
wuwenmei: 金币+1 2015-03-10 11:42:04
你要检洗测表达的话,不需要分开,先上一个的一抗、二抗,显影完了用膜印迹再生液在摇床15min,再TBST 5min一次洗三次,然后在上的二个的一抗、二抗,基本上不会有冲突,如果两个的二抗不一样就更好了
4楼2014-12-15 11:18:37
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biotech_zhou

木虫 (著名写手)

待人以诚:专业/专注/专心

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2014-12-15 18:32:14
就像楼上说的,孵两次不就解决了,要是同时做的话,基本没戏啊。
年末优惠荧光定量pcr、WB、ELISA技术服务一律六折!交流锤炼知识,用心构筑桥梁,以更优质的产品及技术服务助力科研;QQ:2513165427;Email:b
5楼2014-12-15 11:45:10
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wuwenmei

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 秋雨晗晨 at 2014-12-15 11:18:37
你要检洗测表达的话,不需要分开,先上一个的一抗、二抗,显影完了用膜印迹再生液在摇床15min,再TBST 5min一次洗三次,然后在上的二个的一抗、二抗,基本上不会有冲突,如果两个的二抗不一样就更好了

一抗二抗是一样的,你的意思是重复敷两次?还是?我刚刚对研一,能不能具体点呀!谢谢你了?我平常操作都是按正常的步骤来的,所以总是跑不开,就是一条带。谢谢你了。

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下雨天就算没有伞,我也要学会努力奔跑!
6楼2014-12-15 13:31:47
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基础

新虫 (著名写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by wuwenmei at 2014-12-15 09:35:11
我是研一的,做过两次都只出现的一条带哦,就是跑不开,你说的抗体去除液我不怎么懂,能详细解释下吗?谢谢啊...

有卖的,能去除一抗二抗,然后再用另一种抗体

[ 发自小木虫客户端 ]
7楼2014-12-15 16:47:12
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秋雨晗晨

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by wuwenmei at 2014-12-15 13:31:47
一抗二抗是一样的,你的意思是重复敷两次?还是?我刚刚对研一,能不能具体点呀!谢谢你了?我平常操作都是按正常的步骤来的,所以总是跑不开,就是一条带。谢谢你了。
...

不同的蛋白用的抗体不一样啊,也就是一抗是不一样的,比如说14KD的蛋白A用的是A的特异性抗体,12KD的蛋白B用的是B的特异性抗体,那你先用A的一抗抗,显影完了用再生液洗了再上B的一抗,懂么
8楼2014-12-16 16:12:53
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wuwenmei

新虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by 秋雨晗晨 at 2014-12-16 16:12:53
不同的蛋白用的抗体不一样啊,也就是一抗是不一样的,比如说14KD的蛋白A用的是A的特异性抗体,12KD的蛋白B用的是B的特异性抗体,那你先用A的一抗抗,显影完了用再生液洗了再上B的一抗,懂么...

哦,原来是这样,要是他们一抗是一样的,咋办?我的意思是第二条要是是第一条带切割造成的,这个方法也行吗?不好意思,刚接触好多东西还是不太懂,谢谢你解释哈。

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9楼2014-12-16 23:12:50
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