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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 求助关于Western blot.
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wuwenmei

新虫 (小有名气)

[求助] 求助关于Western blot. 已有2人参与

假如我要分离的两个蛋白质大小分为14KD和12KD,由于相差比较近，我可不可以通过调浓缩胶和分离胶的浓度来分离呀，使他们跑的开一点，有没有大神能解决呀哈，谢谢
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下雨天就算没有伞，我也要学会努力奔跑！
1楼 2014-12-15 09:06:01
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基础

新虫 (著名写手)
没跑过这么近的啊，可以用抗体去除液试试

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2楼2014-12-15 09:09:53
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wuwenmei

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 基础 at 2014-12-15 09:09:53
没跑过这么近的啊，可以用抗体去除液试试

我是研一的，做过两次都只出现的一条带哦，就是跑不开，你说的抗体去除液我不怎么懂，能详细解释下吗？谢谢啊
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下雨天就算没有伞，我也要学会努力奔跑！
3楼2014-12-15 09:35:11
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秋雨晗晨

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
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myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-12-15 18:32:04
wuwenmei: 金币+1 2015-03-10 11:42:04
你要检洗测表达的话，不需要分开，先上一个的一抗、二抗，显影完了用膜印迹再生液在摇床15min，再TBST 5min一次洗三次，然后在上的二个的一抗、二抗，基本上不会有冲突，如果两个的二抗不一样就更好了
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4楼2014-12-15 11:18:37
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biotech_zhou

木虫 (著名写手)

待人以诚：专业/专注/专心

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myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-12-15 18:32:14
就像楼上说的，孵两次不就解决了，要是同时做的话，基本没戏啊。
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5楼2014-12-15 11:45:10
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wuwenmei

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 秋雨晗晨 at 2014-12-15 11:18:37
你要检洗测表达的话，不需要分开，先上一个的一抗、二抗，显影完了用膜印迹再生液在摇床15min，再TBST 5min一次洗三次，然后在上的二个的一抗、二抗，基本上不会有冲突，如果两个的二抗不一样就更好了

一抗二抗是一样的，你的意思是重复敷两次？还是？我刚刚对研一，能不能具体点呀！谢谢你了？我平常操作都是按正常的步骤来的，所以总是跑不开，就是一条带。谢谢你了。

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下雨天就算没有伞，我也要学会努力奔跑！
6楼2014-12-15 13:31:47
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基础

新虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by wuwenmei at 2014-12-15 09:35:11
我是研一的，做过两次都只出现的一条带哦，就是跑不开，你说的抗体去除液我不怎么懂，能详细解释下吗？谢谢啊...

有卖的，能去除一抗二抗，然后再用另一种抗体

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7楼2014-12-15 16:47:12
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秋雨晗晨

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by wuwenmei at 2014-12-15 13:31:47
一抗二抗是一样的，你的意思是重复敷两次？还是？我刚刚对研一，能不能具体点呀！谢谢你了？我平常操作都是按正常的步骤来的，所以总是跑不开，就是一条带。谢谢你了。
...

不同的蛋白用的抗体不一样啊，也就是一抗是不一样的，比如说14KD的蛋白A用的是A的特异性抗体，12KD的蛋白B用的是B的特异性抗体，那你先用A的一抗抗，显影完了用再生液洗了再上B的一抗，懂么
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8楼2014-12-16 16:12:53
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wuwenmei

新虫 (小有名气)
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8楼: Originally posted by 秋雨晗晨 at 2014-12-16 16:12:53
不同的蛋白用的抗体不一样啊，也就是一抗是不一样的，比如说14KD的蛋白A用的是A的特异性抗体，12KD的蛋白B用的是B的特异性抗体，那你先用A的一抗抗，显影完了用再生液洗了再上B的一抗，懂么...

哦，原来是这样，要是他们一抗是一样的，咋办？我的意思是第二条要是是第一条带切割造成的，这个方法也行吗？不好意思，刚接触好多东西还是不太懂，谢谢你解释哈。

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下雨天就算没有伞，我也要学会努力奔跑！
9楼2014-12-16 23:12:50
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