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wuwenmei

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[求助] 求助关于Western blot. 已有2人参与

假如我要分离的两个蛋白质大小分为14KD和12KD,由于相差比较近，我可不可以通过调浓缩胶和分离胶的浓度来分离呀，使他们跑的开一点，有没有大神能解决呀哈，谢谢

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1楼 2014-12-15 09:06:01

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wuwenmei

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8楼: Originally posted by 秋雨晗晨 at 2014-12-16 16:12:53
不同的蛋白用的抗体不一样啊，也就是一抗是不一样的，比如说14KD的蛋白A用的是A的特异性抗体，12KD的蛋白B用的是B的特异性抗体，那你先用A的一抗抗，显影完了用再生液洗了再上B的一抗，懂么...

哦，原来是这样，要是他们一抗是一样的，咋办？我的意思是第二条要是是第一条带切割造成的，这个方法也行吗？不好意思，刚接触好多东西还是不太懂，谢谢你解释哈。

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下雨天就算没有伞，我也要学会努力奔跑！

9楼2014-12-16 23:12:50

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基础

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没跑过这么近的啊，可以用抗体去除液试试

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2楼2014-12-15 09:09:53

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2楼: Originally posted by 基础 at 2014-12-15 09:09:53
没跑过这么近的啊，可以用抗体去除液试试

我是研一的，做过两次都只出现的一条带哦，就是跑不开，你说的抗体去除液我不怎么懂，能详细解释下吗？谢谢啊

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3楼2014-12-15 09:35:11

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秋雨晗晨

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myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-12-15 18:32:04
wuwenmei: 金币+1 2015-03-10 11:42:04

你要检洗测表达的话，不需要分开，先上一个的一抗、二抗，显影完了用膜印迹再生液在摇床15min，再TBST 5min一次洗三次，然后在上的二个的一抗、二抗，基本上不会有冲突，如果两个的二抗不一样就更好了

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4楼2014-12-15 11:18:37

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