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ashap

新虫 (初入文坛)

[求助] western blot 求助已有1人参与

求助各位大虾,
我前后两次做WB电泳、转膜条件不变的情况下,只是根据第一次结果增加了一组的上样量,为什么第二次WB的内参三组样完全不齐,前两组条带特别不清楚。另外目的条带两次的都没有,以前做出来都有的。转膜条件是:湿转,恒流250mA,17KD大小蛋白PVDF膜0.22um, 时间为1小时,内参为a-tubulin,目的条带为90kD,PVDF膜0.45um,时间2小时。
有什么地方错的,或者遗漏的,求指出。
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ssy7166

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
这说明你WB做得太少了,说不准你是什么原因。是不是蛋白降解了?煮样条件不当?胶没有配好呀?running buffer是不是有问题呀?等等,一一排除吧。
2楼2015-09-03 15:35:12
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ashap

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by ssy7166 at 2015-09-03 15:35:12
这说明你WB做得太少了,说不准你是什么原因。是不是蛋白降解了?煮样条件不当?胶没有配好呀?running buffer是不是有问题呀?等等,一一排除吧。

胶制得应该没问题,蛋白降解了?没有这么容易吧,变了性冻在-20保存的。电泳buffer对最后会有什么影响呢,不是主要影响最后条带的形状吗?
3楼2015-09-04 13:36:41
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