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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » western blot 求助
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ashap

新虫 (初入文坛)

[求助] western blot 求助 已有1人参与

求助各位大虾，
我前后两次做WB电泳、转膜条件不变的情况下，只是根据第一次结果增加了一组的上样量，为什么第二次WB的内参三组样完全不齐，前两组条带特别不清楚。另外目的条带两次的都没有，以前做出来都有的。转膜条件是：湿转，恒流250mA，17KD大小蛋白PVDF膜0.22um, 时间为1小时，内参为a-tubulin，目的条带为90kD，PVDF膜0.45um，时间2小时。
有什么地方错的，或者遗漏的，求指出。
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1楼 2015-09-01 21:51:17
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ssy7166

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这说明你WB做得太少了，说不准你是什么原因。是不是蛋白降解了？煮样条件不当？胶没有配好呀？running buffer是不是有问题呀？等等，一一排除吧。
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2楼2015-09-03 15:35:12
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ashap

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by ssy7166 at 2015-09-03 15:35:12
这说明你WB做得太少了，说不准你是什么原因。是不是蛋白降解了？煮样条件不当？胶没有配好呀？running buffer是不是有问题呀？等等，一一排除吧。

胶制得应该没问题，蛋白降解了？没有这么容易吧，变了性冻在-20保存的。电泳buffer对最后会有什么影响呢，不是主要影响最后条带的形状吗？
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3楼2015-09-04 13:36:41
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