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求助各位大虾， 我前后两次做WB电泳、转膜条件不变的情况下，只是根据第一次结果增加了一组的上样量，为什么第二次WB的内参三组样完全不齐，前两组条带特别不清楚。另外目的条带两次的都没有，以前做出来都有的。转膜条件是：湿转，恒流250mA，17KD大小蛋白PVDF膜0.22um, 时间为1小时，内参为a-tubulin，目的条带为90kD，PVDF膜0.45um，时间2小时。 有什么地方错的，或者遗漏的，求指出。 |
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ssy7166
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