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Sunshine_WHL

铜虫 (小有名气)

[求助] 求助Western大神,我的pSmad怎么跑出来是三条呢???蓝瘦香菇==

我做成骨方向,是裂解C2C12细胞,然后用Western Blot分析细胞内pSmad1/5/8蛋白的含量。我计算了一下我跑胶的上样量大约45ug,然后按我们实验室前辈们摸索出来的经验,恒电压80V至跑出条带,然后换100V跑,整个过程大约90min。pSmad分子量大约在60kDa,我用的内参GAPDH在36kDa,于是转膜我用300mA转70min,感觉转的挺好的。接下来我用5%BSA室温封闭3h,然后加入1:1000的一抗4度孵育过夜,第二天吸出一抗用TBST洗三遍,每次5min,然后加入1:1000二抗室温孵育2h,然后用TBST洗三遍,每次5min,接下来就用ECL显色剂显色了,可是我跑了好几次感觉都不一样。。。
附件1是我上次跑的pSmad有一条,附件2是我这次跑的居然有3条。。。要哭了,有谁可以解释一下吗?

求助Western大神,我的pSmad怎么跑出来是三条呢???蓝瘦香菇==
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求助Western大神,我的pSmad怎么跑出来是三条呢???蓝瘦香菇==-1
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村太爷

金虫 (正式写手)

2楼2017-03-12 14:33:10
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Sunshine_WHL

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 村太爷 at 2017-03-12 14:33:10
抗体的问题呗

可是我两次用的是同一种抗体。。。莫非是pSmad1/5/8就是有三条么

发自小木虫Android客户端
3楼2017-03-12 14:41:35
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村太爷

金虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by Sunshine_WHL at 2017-03-12 14:41:35
可是我两次用的是同一种抗体。。。莫非是pSmad1/5/8就是有三条么
...

那就可能是蛋白降解啦

发自小木虫Android客户端
4楼2017-03-12 15:58:14
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糖糖糖糖1234

新虫 (初入文坛)

想请教一下,你这个图片在拍照之后,是用什么软件处理的?

发自小木虫Android客户端
5楼2017-03-22 23:23:23
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千与千寻1

新虫 (正式写手)

这个蛋白是不是亚基组成的啊?

发自小木虫Android客户端
正在寻找方向中
6楼2017-03-23 13:53:38
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