| 查看: 1470 | 回复: 5 | ||
Sunshine_WHL铜虫 (小有名气)
|
[求助]
求助Western大神，我的pSmad怎么跑出来是三条呢？？？蓝瘦香菇==
|
|
我做成骨方向，是裂解C2C12细胞，然后用Western Blot分析细胞内pSmad1/5/8蛋白的含量。我计算了一下我跑胶的上样量大约45ug，然后按我们实验室前辈们摸索出来的经验，恒电压80V至跑出条带，然后换100V跑，整个过程大约90min。pSmad分子量大约在60kDa,我用的内参GAPDH在36kDa，于是转膜我用300mA转70min，感觉转的挺好的。接下来我用5%BSA室温封闭3h，然后加入1:1000的一抗4度孵育过夜，第二天吸出一抗用TBST洗三遍，每次5min，然后加入1：1000二抗室温孵育2h，然后用TBST洗三遍，每次5min，接下来就用ECL显色剂显色了，可是我跑了好几次感觉都不一样。。。 附件1是我上次跑的pSmad有一条，附件2是我这次跑的居然有3条。。。要哭了，有谁可以解释一下吗？  1.PNG  2.PNG |
回复此楼» 猜你喜欢
今天系统多次维护，明天很可能放榜！
已经有5人回复
-
欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律
已经有74人回复
-
岩土工程学报什么时候才能终审完呐
已经有4人回复
-
时间戳又变了8-15
已经有25人回复
-
2027广东省杰青
已经有6人回复
-
快农历七夕节了，轻松一下，男人悄悄话，女施主请不要进来。
已经有3人回复
-
哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜？
已经有9人回复
-
咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否
已经有26人回复
-
我的国基提前知道中了，可是同事的操作让我实在接受不了，怎么会有这样的人
已经有16人回复
-
有时候，自然基金真的不能太认真 （我的申报经验）
已经有12人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- western blot经验求助
已经有22人回复
- western blot 求助
已经有2人回复
- western blot出现很多杂带，求助，交流？谢谢
已经有5人回复
- 大分子量蛋白WESTERN BLOT问题讨论与求助
已经有1人回复
- 求助关于Western blot.
已经有8人回复
- 求助Western Blot实验条带没出现的原因分析及解决办法
已经有7人回复
- western blot实验相关求助
已经有1人回复
- 急！500kD 蛋白western 求助
已经有17人回复
- 500kD 蛋白western 求助
已经有14人回复
- western-blot求助，急急急！！求指点求建议！！！
已经有12人回复
- 求助western mark 转膜不全，急！
已经有7人回复
- 求助，Western-Blot转膜不成功
已经有22人回复
- western blot 求助，请高手指点一下
已经有8人回复
- 【求助/交流】western blot 缺带 断带
已经有21人回复
- 【求助/交流】Western转膜不完全
已经有2人回复
- 【求助/交流】请教大分子量蛋白western blot转膜的一些问题
已经有10人回复
- 【求助】紧急求助：western分离胶浓度怎么确定？
已经有10人回复
- 【求助】大分子量蛋白western条件
已经有0人回复
- 【求助/交流】极小分子与极大分子蛋白的Western Bloting转膜求助！
已经有10人回复
- 【求助/交流】做western实验中问题请教
已经有8人回复
- 【求助/交流】western blot
已经有9人回复
- 【求助/交流】有关western-blot的一些问题
已经有18人回复
- 【求助/交流】做western加一抗后，室温过夜会有什么影响？
已经有4人回复
- 【求助/交流】帮忙分析下western结果
已经有5人回复
2楼2017-03-12 14:33:10
Sunshine_WHL
铜虫 (小有名气)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 476.3
- 散金: 25
- 帖子: 106
- 在线: 40.2小时
- 虫号: 2736490
- 注册: 2013-10-19
- 性别: MM
- 专业: 生物医用高分子材料
3楼2017-03-12 14:41:35
4楼2017-03-12 15:58:14
5楼2017-03-22 23:23:23
千与千寻1
新虫 (正式写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1314.3
- 散金: 209
- 红花: 5
- 帖子: 635
- 在线: 31小时
- 虫号: 4273206
- 注册: 2015-12-07
- 性别: MM
- 专业: 作物杂种优势及其利用
6楼2017-03-23 13:53:38
25