[求助] 求助Western大神，我的pSmad怎么跑出来是三条呢？？？蓝瘦香菇==

我做成骨方向，是裂解C2C12细胞，然后用Western Blot分析细胞内pSmad1/5/8蛋白的含量。我计算了一下我跑胶的上样量大约45ug，然后按我们实验室前辈们摸索出来的经验，恒电压80V至跑出条带，然后换100V跑，整个过程大约90min。pSmad分子量大约在60kDa,我用的内参GAPDH在36kDa，于是转膜我用300mA转70min，感觉转的挺好的。接下来我用5%BSA室温封闭3h，然后加入1:1000的一抗4度孵育过夜，第二天吸出一抗用TBST洗三遍，每次5min，然后加入1：1000二抗室温孵育2h，然后用TBST洗三遍，每次5min，接下来就用ECL显色剂显色了，可是我跑了好几次感觉都不一样。。。 附件1是我上次跑的pSmad有一条，附件2是我这次跑的居然有3条。。。要哭了，有谁可以解释一下吗？ 1.PNG 2.PNG

回复此楼

» 猜你喜欢

• 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 已经有4人回复
• 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 已经有3人回复
• 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 已经有3人回复
• 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 已经有3人回复
• 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 已经有3人回复
• 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 已经有3人回复
• 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 已经有4人回复
• 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 已经有5人回复
• 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 已经有5人回复
• 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 已经有5人回复

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

• western blot经验求助 已经有22人回复
• western blot 求助 已经有2人回复
• western blot出现很多杂带，求助，交流？谢谢 已经有5人回复
• 大分子量蛋白WESTERN BLOT问题讨论与求助 已经有1人回复
• 求助关于Western blot. 已经有8人回复
• 求助Western Blot实验条带没出现的原因分析及解决办法 已经有7人回复
• western blot实验相关求助 已经有1人回复
• 急！500kD 蛋白western 求助 已经有17人回复
• 500kD 蛋白western 求助 已经有14人回复
• western-blot求助，急急急！！求指点求建议！！！ 已经有12人回复
• 求助western mark 转膜不全，急！ 已经有7人回复
• 求助，Western-Blot转膜不成功 已经有22人回复
• western blot 求助，请高手指点一下 已经有8人回复
• 【求助/交流】western blot 缺带 断带 已经有21人回复
• 【求助/交流】Western转膜不完全 已经有2人回复
• 【求助/交流】请教大分子量蛋白western blot转膜的一些问题 已经有10人回复
• 【求助】紧急求助：western分离胶浓度怎么确定？ 已经有10人回复
• 【求助】大分子量蛋白western条件 已经有0人回复
• 【求助/交流】极小分子与极大分子蛋白的Western Bloting转膜求助！ 已经有10人回复
• 【求助/交流】做western实验中问题请教 已经有8人回复
• 【求助/交流】western blot 已经有9人回复
• 【求助/交流】有关western-blot的一些问题 已经有18人回复
• 【求助/交流】做western加一抗后，室温过夜会有什么影响？ 已经有4人回复
• 【求助/交流】帮忙分析下western结果 已经有5人回复