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[交流]
western blot经验求助
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属性十成新小白，希望和大家探讨交流关于基础的WB实验经验。连续跑了三次，标准蛋白只可见一粒小点，胶片背景呈暗黑而不是正常的暗蓝色，想求证是否和抗体重复使用次数过多失活或者TBST浓度偏高有关？还是存在其他基本的问题？ 大过节的已经蠢哭 请经过的列位大侠拉一把人群中我奋力举起的双手！ 发自小木虫Android客户端 |
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4楼2015-11-11 23:22:26
12楼2015-11-11 23:49:59
14楼2015-11-12 06:51:57
15楼2015-11-12 09:35:38
16楼2015-11-12 09:40:53
17楼2015-11-12 11:01:30
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谢谢！ 嗯，首先保持膜湿润和一抗孵育温度是没问题的，只是我一抗稀释1000倍，回收重复使用了三次是否有影响。 100mlTBST+1%BSA封闭1h 洗涤用TBST：4.04g Nacl,6.6gTris定容至500ml 曝光时间5min,10min和30min都做过，最后用的30min 做的LC3蛋白 胶片左边是marker位置，左上角一小点预计为跑出的蛋白条带…… 请赐教  发自小木虫Android客户端 |
18楼2015-11-12 13:09:15
19楼2015-11-12 13:12:00
20楼2015-11-12 13:22:39
21楼2015-11-12 14:25:54
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确定没有曝光，我都快夜盲反应了……认为是一抗使用次数太多失活，或者应该加大稀释倍数，减少曝光时间。一个变量一个变量逐步来，敢问大侠的蛋白种类（磷酸话还是GA）？,曝光时间范围？封闭液配方和封闭时间？严重感谢 发自小木虫Android客户端 |
22楼2015-11-12 14:31:20
23楼2015-11-12 14:57:05
简单回复
2015-11-11 23:14
回复
babysheep963(金币+1): 谢谢参与
2015-11-11 23:20
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babysheep963(金币+1): 谢谢参与
哦 ！
longwave5楼
2015-11-11 23:28
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babysheep963(金币+1): 谢谢参与
祝福 发自小木虫Android客户端
dmbb6楼
2015-11-11 23:28
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babysheep963(金币+1): 谢谢参与
白雪飞扬7楼
2015-11-11 23:33
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babysheep963(金币+1): 谢谢参与
^_^ 发自小木虫IOS客户端
尘轩无梦8楼
2015-11-11 23:34
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babysheep963(金币+1): 谢谢参与
， [ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
小鱼儿3129楼
2015-11-11 23:39
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babysheep963(金币+1): 谢谢参与
。 发自小木虫Android客户端
billie11310楼
2015-11-11 23:45
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babysheep963(金币+1): 谢谢参与
billie11311楼
2015-11-11 23:46
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shenrenren13楼
2015-11-12 06:24
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babysheep963(金币+1): 谢谢参与