| 查看: 1005 | 回复: 7 | |||
[交流]
【求助/交流】求教蛋白高手 已有3人参与
|
|
这几天在摆弄全抗表达，由于没有经验第一次表达时，做的SDS-PAGE胶并且用的也是变性的上样缓冲液，煮过之后上样SDS-PAGE电泳并western blot检测，结果只显示了重链大小的条带，师兄们说是变性使轻重链解开了，这个抗体只检测到重链没有检测到轻链，应该跑非变性胶，所有的缓冲液都是不能加SDS和巯基乙醇。 按照师兄的提示做了非变性电泳及检测并用上次的样做了对照，可是结果挺奇怪了，貌似全抗大小的片段出现了，而上次的对照却没有条带出现。 高手帮忙解释一下，还有个问题求教：我有轻重链DNA知道其序列，分别克隆到载体上表达后形成全抗，怎么计算其全抗的大小及其pI |
回复此楼» 猜你喜欢
筑牢营养安全线：以精准检测，护健康基石
已经有0人回复
-
推荐一些20种氨基酸检测的实际应用案例
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有221人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 请教高手，要用凝固的猪血做蛋白质电泳，怎么提取蛋白质？
已经有4人回复
- 求助蛋白纯化的高手
已经有5人回复
- 要做蛋白纯化了，求高手指教注意细节
已经有8人回复
- 蛋白酶解后 得到的肽 比蛋白还多 求高人解释一下
已经有12人回复
- 大肠杆菌表达蛋白提取总不成功，求助高手指教！
已经有5人回复
- 请问哪位高手用琼脂糖电泳跑过蛋白？
已经有10人回复
- 求教小分子与蛋白结合常数的测定方法
已经有15人回复
- 求教多糖、蛋白的HPLC
已经有12人回复
- 求教过柱后，酶标仪的使用和酶标板，SDS-PAGE染色
已经有22人回复
- 蛋白经透析袋透析后出现浑浊，急求高手帮忙~！
已经有12人回复
- 蛋白酶基因表达，用的Bacillus subtilis系统，但总是表达不出，求高人指点……
已经有19人回复
- 请教高手 电泳为什么是蛋白质小分子跑在最下面
已经有10人回复
- 【求助/交流】求高手指点！关于用C43（DE3)表达膜蛋白
已经有4人回复
- 【求助/交流】求教一个关于酶方面的问题，请高手不吝赐教
已经有10人回复
- 【求助】关于豆腐制作工艺求教~
已经有13人回复
2楼2010-10-18 16:24:25
3楼2010-10-18 17:37:01
月月大可
木虫 (著名写手)
- MolEPI: 3
- 应助: 13 (小学生)
- 金币: 3272.1
- 散金: 1393
- 红花: 17
- 帖子: 1674
- 在线: 295.7小时
- 虫号: 549127
- 注册: 2008-04-20
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
4楼2010-10-18 18:59:48
月月大可
木虫 (著名写手)
- MolEPI: 3
- 应助: 13 (小学生)
- 金币: 3272.1
- 散金: 1393
- 红花: 17
- 帖子: 1674
- 在线: 295.7小时
- 虫号: 549127
- 注册: 2008-04-20
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+1):热心虫友。 2010-10-18 20:52:04
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+1):热心虫友。 2010-10-18 20:52:04
5楼2010-10-18 20:44:48
6楼2010-10-18 21:23:21
月月大可
木虫 (著名写手)
- MolEPI: 3
- 应助: 13 (小学生)
- 金币: 3272.1
- 散金: 1393
- 红花: 17
- 帖子: 1674
- 在线: 295.7小时
- 虫号: 549127
- 注册: 2008-04-20
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
|
还想请教一下，全抗是由两条轻链和两条重链组成的，我的重轻链是在两个不同的载体上表达的，共转染细胞，表达后形成全抗，那我就单纯地把重链和轻链的分子量/pI加和么，还是有什么具体的公式么？ 分子量和等电点单纯的加和都是不准确的。 抗体轻重链之间有二硫键连接，不加还原剂的情况下单纯的sds不能打开（我是这样认为的）这样在进行SDS-PAGE的时候蛋白的空间结构会影响表观的分子量，你无法判断。 如果进行native电泳，除非你有已知分子量的蛋白作为marker，否则很难去判断大小。 pI的确定一般对于单个蛋白的预测相对准确一些，对于复合物的预测不太靠谱，只能参考一下吧。想要精确的需要等点聚焦。 没有pI你还想做native电泳就多看看文献，了解一下类似蛋白的pI，然后确定使用酸性native还是碱性native。 |
7楼2010-10-19 10:33:59
8楼2010-10-19 15:42:45