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hflf

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】求教蛋白高手 已有3人参与

这几天在摆弄全抗表达,由于没有经验第一次表达时,做的SDS-PAGE胶并且用的也是变性的上样缓冲液,煮过之后上样SDS-PAGE电泳并western blot检测,结果只显示了重链大小的条带,师兄们说是变性使轻重链解开了,这个抗体只检测到重链没有检测到轻链,应该跑非变性胶,所有的缓冲液都是不能加SDS和巯基乙醇。

按照师兄的提示做了非变性电泳及检测并用上次的样做了对照,可是结果挺奇怪了,貌似全抗大小的片段出现了,而上次的对照却没有条带出现。

高手帮忙解释一下,还有个问题求教:我有轻重链DNA知道其序列,分别克隆到载体上表达后形成全抗,怎么计算其全抗的大小及其pI
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行到水穷处,坐看云起时!
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meisme.2006

新虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
你好,能否加我QQ交流下,我想请教你个问题,好吗
3楼2010-10-18 17:37:01
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hflf

金虫 (小有名气)

高手都去哪儿了,还是我说的不清楚?
行到水穷处,坐看云起时!
2楼2010-10-18 16:24:25
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月月大可

木虫 (著名写手)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
scelab(金币+2):谢谢交流 2010-10-18 21:39:09
翻译成氨基酸序列,利用DNAman 分力量和等电点可以一次算出来

貌似我在木虫中已不只一次介绍过具体做法了。搜搜以前的回帖吧。
4楼2010-10-18 18:59:48
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月月大可

木虫 (著名写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
dhd997(金币+1):热心虫友。 2010-10-18 20:52:04
5楼2010-10-18 20:44:48
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