| 查看: 6090 | 回复: 10 | ||
[求助]
连接转化后平板不长菌 已有1人参与
|
||
|
质粒5k，基因1.5k，因为之前做也一直长不出来，就换了种方法，重新提了质粒，然后直接用酶切好的质粒和pcr的基因连。质粒浓度是 17.8 基因浓度是 8 连接体系是 质粒 5.5ul 基因 8ul 5×CEⅡBuffer 4ul ExnaseⅡ 2ul ddH2O 0.5ul 按照说明书是37℃半小时连接 对照组只有质粒，（加了感受态）转化时的感受态是直接买的，转化效果很好，转化是冰上半小时，42℃水浴1分钟，冰上2分钟，摇床200转1小时，结果感受态和对照组都没长，这是什么原因呀，多次重复后都没结果 【之前的方法是将双酶切的基因和质粒连接，基因浓度估计10，质粒30，连接时两者摩尔，比例是7，连4小时，转化的方法一样，但是感受态和对照组都没长】 发自小木虫Android客户端 |
回复此楼» 猜你喜欢
筑牢营养安全线：以精准检测，护健康基石
已经有0人回复
-
推荐一些20种氨基酸检测的实际应用案例
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有114人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 关于16SrRNA细菌鉴定方面，最后待测片段连接转化出现了问题。请大神帮忙~谢谢
已经有0人回复
- 转化相关问题-无法转化成功
已经有17人回复
- PET28a 转化后不长菌 换pet32a 需要什么注意事项？
已经有3人回复
- 连接转化时涂板阴性对照也长菌
已经有3人回复
- 转化BL21(DE32),涂含氨苄平板，37度培养，菌长的特别少，几个。。。求大神分析原因
已经有16人回复
- 连接载体转化后挑单菌落，菌落pcr扩出条带，但是摇菌摇不起来
已经有5人回复
- 大肠杆菌氨苄平板不长菌
已经有31人回复
- 目的片段载体片段连接不长菌
已经有19人回复
- 转化后平板不长菌
已经有19人回复
- 我酶切连接总是连不上去，连了很长时间的，恳请高手过来帮帮我
已经有22人回复
- 大肠杆菌培养 质粒提取后困惑
已经有16人回复
- 载体构建转化后长菌落，挑菌活化不长
已经有2人回复
- 克隆转化，转化子就是不含目的基因。
已经有12人回复
- 质粒的连接与转化
已经有7人回复
- 连接转化不长菌是怎么回事？？？
已经有15人回复
- 转化大肠杆菌平板出现卫星菌落是怎么回事？
已经有12人回复
- （侯氏出品）双酶切连接反应之全攻略
已经有89人回复
- 双酶切，连接，转化问题
已经有30人回复
- 连接转化
已经有13人回复
- 目的基因连接pGEX-6p-1进行转化的问题
已经有14人回复
- 【求助/交流】关于酶切连接转化的问题
已经有10人回复
sky蒲公英
版主 (文坛精英)
- 应助: 177 (高中生)
- 贵宾: 15.664
- 金币: 119295
- 散金: 13465
- 红花: 300
- 沙发: 1428
- 帖子: 19480
- 在线: 5618.4小时
- 虫号: 3384889
- 注册: 2014-08-27
- 性别: GG
- 专业: 免疫生物学
- 管辖: 文献求助
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-12-14 22:30:29
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-12-14 22:30:29
|
对照组都没长，应该是在转化这一步出问题了。试着热激时间延长30s,摇床100rpm左右就行，复苏用的培养基不要加抗生素。 发自小木虫Android客户端 |
3楼2016-12-13 23:48:59
1163475954
新虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 4.1
- 散金: 17
- 帖子: 96
- 在线: 175.5小时
- 虫号: 3216612
- 注册: 2014-05-15
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
|
你的质粒浓度为什么这么低，你点个样看看是否真的有质粒，另外你的线性化的载体和目的片段怎么来的，是切胶纯化过的吗，质量怎么样，是否有污染，尤其是盐离子，再者你的目地片段和载体用诺维赞的质粒应在100ng也就是6ul左右，目的片段60ng也就是7.5ul的效果才是最好的，对照也没有转化有问题，极大可能是质粒的问题 发自小木虫Android客户端 |
9楼2016-12-16 18:49:21
2楼2016-12-13 22:47:20
sky蒲公英
版主 (文坛精英)
- 应助: 177 (高中生)
- 贵宾: 15.664
- 金币: 119295
- 散金: 13465
- 红花: 300
- 沙发: 1428
- 帖子: 19480
- 在线: 5618.4小时
- 虫号: 3384889
- 注册: 2014-08-27
- 性别: GG
- 专业: 免疫生物学
- 管辖: 文献求助
4楼2016-12-13 23:49:36
5楼2016-12-14 08:07:47
6楼2016-12-14 12:13:59
7楼2016-12-14 12:16:58
|
没。。。。 发自小木虫Android客户端 |
8楼2016-12-14 12:17:14
田生帅菜
新虫 (正式写手)
- 应助: 17 (小学生)
- 金币: 1765.1
- 散金: 369
- 红花: 11
- 帖子: 390
- 在线: 55.2小时
- 虫号: 5199485
- 注册: 2016-11-04
- 性别: GG
- 专业: 病毒学
10楼2016-12-16 21:22:05