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小七sev7en

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[求助] 转化BL21(DE32),涂含氨苄平板，37度培养，菌长的特别少，几个。。。求大神分析原因已有9人参与

做原核表达，双酶切后，目的基因与载体连接，过夜连接，转化BL21，冰上放30min，热激90s，静止3min。加800ul不含氨苄培养基，37度，220rpm摇菌40min，涂含氨苄的平板，37度培养16小时以上。。问题来了。。菌落经常长的很少，一两个，但是偶尔也会有一两次长的多些。。。。怎么回事？？

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1楼 2014-11-25 17:28:39

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zhaodahe

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【答案】应助回帖

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小七sev7en(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-11-26 10:10:18

一般连接产物不会直接转化表达宿主，而是前转到JM109等宿主，验证正确后再转BL21。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]

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2楼2014-11-26 08:32:50

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korchagin

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只不过是转化效率的问题

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9楼2014-11-28 11:32:38

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天地一微尘

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小七sev7en(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-11-27 20:02:32

就是转化率不高。从质粒的纯度与浓度，以及载体的浓度到转化过程的每一步都会对转化率产生影响，所以在做的时候要小心。不过，只要有一个转化成功就可以，我做的时候也有只有一个克隆的情况，但只要是正确的就OK。

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3楼2014-11-26 23:24:32

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小七sev7en

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2楼: Originally posted by zhaodahe at 2014-11-26 08:32:50
一般连接产物不会直接转化表达宿主，而是前转到JM109等宿主，验证正确后再转BL21。

就是转到JM109后，提取质粒，然后质粒转化BL21吧？。。。我们现在转到trans5α 应该也可以吧

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4楼2014-11-27 09:18:21

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3楼: Originally posted by 天地一微尘 at 2014-11-26 23:24:32
就是转化率不高。从质粒的纯度与浓度，以及载体的浓度到转化过程的每一步都会对转化率产生影响，所以在做的时候要小心。不过，只要有一个转化成功就可以，我做的时候也有只有一个克隆的情况，但只要是正确的就OK。

是转化率的问题吗》？没有转化进去的话，空载体也能长成菌落吧？

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5楼2014-11-27 09:21:54

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