应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 分子生理 » 转化BL21(DE32),涂含氨苄平板，37度培养，菌长的特别少，几个。。。求大神分析原因
51/1返回列表
查看: 2980  |  回复: 16
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

小七sev7en

新虫 (初入文坛)

[求助] 转化BL21(DE32),涂含氨苄平板，37度培养，菌长的特别少，几个。。。求大神分析原因 已有9人参与

做原核表达，双酶切后，目的基因与载体连接，过夜连接，转化BL21，冰上放30min，热激90s，静止3min。加800ul不含氨苄培养基，37度，220rpm摇菌40min，涂含氨苄的平板，37度培养16小时以上。。问题来了。。菌落经常长的很少，一两个，但是偶尔也会有一两次长的多些。。。。怎么回事？？
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2014-11-25 17:28:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

天地一微尘

铁杆木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
小七sev7en(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-11-27 20:02:32
就是转化率不高。从质粒的纯度与浓度，以及载体的浓度到转化过程的每一步都会对转化率产生影响，所以在做的时候要小心。不过，只要有一个转化成功就可以，我做的时候也有只有一个克隆的情况，但只要是正确的就OK。
赞一下 回复此楼
3楼2014-11-26 23:24:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 17 个回答

zhaodahe

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
小七sev7en(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-11-26 10:10:18
一般连接产物不会直接转化表达宿主，而是前转到JM109等宿主，验证正确后再转BL21。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下(3人) 回复此楼
2楼2014-11-26 08:32:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小七sev7en

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zhaodahe at 2014-11-26 08:32:50
一般连接产物不会直接转化表达宿主，而是前转到JM109等宿主，验证正确后再转BL21。

就是转到JM109后，提取质粒，然后质粒转化BL21吧？。。。我们现在转到trans5α 应该也可以吧
赞一下 回复此楼
4楼2014-11-27 09:18:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小七sev7en

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 天地一微尘 at 2014-11-26 23:24:32
就是转化率不高。从质粒的纯度与浓度，以及载体的浓度到转化过程的每一步都会对转化率产生影响，所以在做的时候要小心。不过，只要有一个转化成功就可以，我做的时候也有只有一个克隆的情况，但只要是正确的就OK。

是转化率的问题吗》？没有转化进去的话，空载体也能长成菌落吧？
赞一下 回复此楼
5楼2014-11-27 09:21:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 17 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 0856求调剂 +4 zhn03 2026-03-25 5/250 2026-03-25 22:42 by 418490947
[考研] 求调剂 +3 QiMing7 2026-03-25 3/150 2026-03-25 21:13 by 给你你注意休息
[考研] 北科281学硕材料求调剂 +13 tcxiaoxx 2026-03-20 15/750 2026-03-25 20:17 by Alex alex
[考研] 材料专硕 335 分求调剂 +4 拒绝冷暴力 2026-03-25 4/200 2026-03-25 18:45 by haxia
[考研] 一志愿 西北大学 ，070300化学学硕，总分287，双非一本，求调剂。 +4 晨昏线与星海 2026-03-20 4/200 2026-03-25 10:16 by allen-yin
[考研] 340求调剂 +5 话梅糖111 2026-03-24 5/250 2026-03-25 06:53 by ilovexiaobin
[考研] 311求调剂 +3 冬十三 2026-03-24 3/150 2026-03-24 21:31 by peike
[考研] 0856材料专硕353求调剂 +6 NIFFFfff 2026-03-20 6/300 2026-03-24 21:02 by hello七七
[有机交流] 有机合成求助 20+3 FENGSHUJEI 2026-03-23 5/250 2026-03-24 19:31 by 88817753
[考研] 276求调剂。有半年电池和半年高分子实习经历 +9 材料学257求调剂 2026-03-23 10/500 2026-03-24 07:36 by wangy0907
[考研] 求老师收我 +3 zzh16938784 2026-03-23 3/150 2026-03-23 12:56 by ztnimte
[考研] 一志愿070300浙大化学358分，求调剂！ +4 酥酥鱼.. 2026-03-21 4/200 2026-03-23 08:12 by Iveryant
[考研] 一志愿东华大学化学070300，求调剂 +7 2117205181 2026-03-21 8/400 2026-03-22 22:55 by chixmc
[考研] 308求调剂 +3 墨墨漠 2026-03-21 3/150 2026-03-22 16:54 by i_cooler
[考研] 296求调剂 +4 www_q 2026-03-20 4/200 2026-03-21 17:26 by 学员8dgXkO
[考研] 南京大学化学376求调剂 +3 hisfailed 2026-03-19 6/300 2026-03-20 23:43 by hisfailed
[考研] 290求调剂 +7 ^O^乜 2026-03-19 7/350 2026-03-20 21:43 by JourneyLucky
[考研] 招收调剂硕士 +4 lidianxing 2026-03-19 12/600 2026-03-20 12:25 by lidianxing
[考研] 320求调剂0856 +3 不想起名字112 2026-03-19 3/150 2026-03-19 22:53 by 学员8dgXkO
[考研] 材料考研调剂 +3 xwt。 2026-03-19 3/150 2026-03-19 11:22 by w沐阳w
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭