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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 分子生理 » 转化BL21(DE32),涂含氨苄平板，37度培养，菌长的特别少，几个。。。求大神分析原因
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sanmiao

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
小七sev7en(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-11-29 20:51:19
这个原因很多，很有可能是你的感受态转化效率比较低。直接转化BL21 应该是没有什么问题的，我们也经常那么做。但是第一，得 保证感受态的转化效率；二，得是你的片段的酶切位点确定能切开，有些因为保护碱基不合适，所以酶切效率很低！还有，得用高效的连接酶啊，有些酶确实不行啊！！1
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11楼2014-11-29 12:29:42
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爱睡猪

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

看你这名字和专业，貌似认识啊
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ControlMyself
12楼2014-11-29 14:22:08
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hmily890404

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by 小七sev7en at 2014-11-27 09:18:21
就是转到JM109后，提取质粒，然后质粒转化BL21吧？。。。我们现在转到trans5α 应该也可以吧...

对。我就是在用trans5α。就是要连接产物先转trans5α挑单克隆提质粒酶切或者PCR验证，正确后再转BL21。
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13楼2014-11-29 20:13:08
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小七sev7en

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
10楼: Originally posted by hajierlove at 2014-11-28 13:03:18
一两个有你的阳性菌也是可以的啊，我的有时候就长四五个，一般都是阳性的。你的连接体系是多少？目的片段浓度低的话可以多加一点

关键是没有阳性撒、、我就是在想不长菌，或长的特比少，是因为菌死了，还是说没转化进去等等原因造成的啊
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14楼2014-11-30 15:01:31
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小七sev7en

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by zhaodahe at 2014-11-27 10:13:15
那都可以的
...

你好，我还想问下你。就是我构建32a载体后，转化到DH5α，菌液测序现在结果正确。然后我扩大培养提取质粒。浓度约为50mg/ul。然后转化BL21，但是菌液pcr老是没有任何条带。是什么原因呢？？
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15楼2014-12-02 21:51:31
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zhaodahe

木虫 (正式写手)
引用回帖:
15楼: Originally posted by 小七sev7en at 2014-12-02 21:51:31
你好，我还想问下你。就是我构建32a载体后，转化到DH5α，菌液测序现在结果正确。然后我扩大培养提取质粒。浓度约为50mg/ul。然后转化BL21，但是菌液pcr老是没有任何条带。是什么原因呢？？...

质粒转BL21之后有划单克隆吗？另外，你用菌液做模板不能扩增出条带，也可能是pcr系统受到影响了，试试把菌体离心下来，快抽下质粒做模板。一般很少直接用菌液pcr，平板菌落pcr倒是常用。
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16楼2014-12-03 06:16:49
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快乐卿

银虫 (小有名气)
我也遇到过这种情况。在排除感受态转化效率没问题后，发现可能是因为在连接产物加入感受态时用抢吹打了几下的原因，感受态较脆弱吧。
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17楼2014-12-31 16:27:07
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