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连接转化后平板不长菌 已有1人参与
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质粒5k，基因1.5k，因为之前做也一直长不出来，就换了种方法，重新提了质粒，然后直接用酶切好的质粒和pcr的基因连。质粒浓度是 17.8 基因浓度是 8 连接体系是 质粒 5.5ul 基因 8ul 5×CEⅡBuffer 4ul ExnaseⅡ 2ul ddH2O 0.5ul 按照说明书是37℃半小时连接 对照组只有质粒，（加了感受态）转化时的感受态是直接买的，转化效果很好，转化是冰上半小时，42℃水浴1分钟，冰上2分钟，摇床200转1小时，结果感受态和对照组都没长，这是什么原因呀，多次重复后都没结果 【之前的方法是将双酶切的基因和质粒连接，基因浓度估计10，质粒30，连接时两者摩尔，比例是7，连4小时，转化的方法一样，但是感受态和对照组都没长】 发自小木虫Android客户端 |
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你的质粒浓度为什么这么低，你点个样看看是否真的有质粒，另外你的线性化的载体和目的片段怎么来的，是切胶纯化过的吗，质量怎么样，是否有污染，尤其是盐离子，再者你的目地片段和载体用诺维赞的质粒应在100ng也就是6ul左右，目的片段60ng也就是7.5ul的效果才是最好的，对照也没有转化有问题，极大可能是质粒的问题 发自小木虫Android客户端 |
9楼2016-12-16 18:49:21
2楼2016-12-13 22:47:20
sky蒲公英
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-12-14 22:30:29
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-12-14 22:30:29
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对照组都没长，应该是在转化这一步出问题了。试着热激时间延长30s,摇床100rpm左右就行，复苏用的培养基不要加抗生素。 发自小木虫Android客户端 |
3楼2016-12-13 23:48:59
sky蒲公英
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4楼2016-12-13 23:49:36
