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xms0422

铁虫 (小有名气)

[求助] T4连接酶反应体系

要做酶连了,实验室买了takara的T4连接酶,但是说明书上并没有反应条件和体系,求助各位大神,反应温度和体系应该是怎样比较合适?

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xms0422

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 迷路人啊 at 2016-11-21 08:36:55
我们连接体系10微升    1微升buffer  0.5微升酶   载体片段一般1比10   16度过夜连接

请问连接后需要65度孵育10分钟再转入感受态吗?

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5楼2016-11-23 08:44:24
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xms0422

铁虫 (小有名气)

用的是Ncol 和Xhol两个酶切的

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2楼2016-11-21 07:02:44
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迷路人啊

新虫 (小有名气)

我们连接体系10微升    1微升buffer  0.5微升酶   载体片段一般1比10   16度过夜连接

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3楼2016-11-21 08:36:55
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huhao0230

金虫 (初入文坛)

一般载体和片段的总浓度是1-10ng/ul,片段和载体的摩尔浓度比是2-6之间
4楼2016-11-21 10:38:19
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