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无心之感金虫 (正式写手)
紫霄洞洞主
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[求助]
分子clone之小白求助篇 已有2人参与
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 本菜鸟最近遇到个顽固的作死cloning，硬生生死活连不上呐。你到底要闹哪样。 此处省略吐槽字样一千。。进入正题： 问题描述：准备构建一个某蛋白定位载体，准备连接的片段有两个：该基因自身的Promoter（长约2K），Genomic（长约3K）测序都没问题；载体是pCAMBIA1301附带有EGFP序列（常用的植物表达载体）。双酶切回收后，使用T4 liagse（TaKaRa公司的）。反应体系如下： T4 liagse....................... 2 ul Promote片段................10ul Genomic 片段................10ul pCAMBIA 1301.............. 4ul T4 buffer...................... 3ul 反应温度: 常温； 反应时间：4h， 然后转化。 但是。。 问题来了。为嘛它就是连不上捏。。 片段双酶切回收没有问题，酶切后1301空载也不长，说明载体已经切开了。难道是T4酶的问题？ 别的我也想不到了。 欢迎来和我讨论帮忙解决问题！欢迎提供新的方法（如此最好）！但凡有益，即发赏赐～  |
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