| 查看: 648 | 回复: 2 | ||
无心之感金虫 (正式写手)
紫霄洞洞主
|
[求助]
分子clone之小白求助篇 已有2人参与
|
 本菜鸟最近遇到个顽固的作死cloning，硬生生死活连不上呐。你到底要闹哪样。 此处省略吐槽字样一千。。进入正题： 问题描述：准备构建一个某蛋白定位载体，准备连接的片段有两个：该基因自身的Promoter（长约2K），Genomic（长约3K）测序都没问题；载体是pCAMBIA1301附带有EGFP序列（常用的植物表达载体）。双酶切回收后，使用T4 liagse（TaKaRa公司的）。反应体系如下： T4 liagse....................... 2 ul Promote片段................10ul Genomic 片段................10ul pCAMBIA 1301.............. 4ul T4 buffer...................... 3ul 反应温度: 常温； 反应时间：4h， 然后转化。 但是。。 问题来了。为嘛它就是连不上捏。。 片段双酶切回收没有问题，酶切后1301空载也不长，说明载体已经切开了。难道是T4酶的问题？ 别的我也想不到了。 欢迎来和我讨论帮忙解决问题！欢迎提供新的方法（如此最好）！但凡有益，即发赏赐～  |
回复此楼» 猜你喜欢
筑牢营养安全线：以精准检测，护健康基石
已经有0人回复
-
推荐一些20种氨基酸检测的实际应用案例
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有238人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
evangelina
无虫 (小有名气)
- 应助: 72 (初中生)
- 金币: -31.9
- 红花: 3
- 帖子: 135
- 在线: 58.4小时
- 虫号: 3180737
- 注册: 2014-05-05
- 性别: GG
- 专业: 病毒学
有时糊涂了抗生素用错
2楼2015-08-26 11:48:36
string1987
金虫 (小有名气)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 1188.8
- 散金: 25
- 红花: 3
- 帖子: 156
- 在线: 38.2小时
- 虫号: 825536
- 注册: 2009-08-10
- 性别: GG
- 专业: 发育生物学
3楼2015-08-26 12:47:19