| 查看: 855 | 回复: 2 | ||
无心之感金虫 (正式写手)
紫霄洞洞主
|
[求助]
分子clone之小白求助篇 已有2人参与
|
 本菜鸟最近遇到个顽固的作死cloning，硬生生死活连不上呐。你到底要闹哪样。 此处省略吐槽字样一千。。进入正题： 问题描述：准备构建一个某蛋白定位载体，准备连接的片段有两个：该基因自身的Promoter（长约2K），Genomic（长约3K）测序都没问题；载体是pCAMBIA1301附带有EGFP序列（常用的植物表达载体）。双酶切回收后，使用T4 liagse（TaKaRa公司的）。反应体系如下： T4 liagse....................... 2 ul Promote片段................10ul Genomic 片段................10ul pCAMBIA 1301.............. 4ul T4 buffer...................... 3ul 反应温度: 常温； 反应时间：4h， 然后转化。 但是。。 问题来了。为嘛它就是连不上捏。。 片段双酶切回收没有问题，酶切后1301空载也不长，说明载体已经切开了。难道是T4酶的问题？ 别的我也想不到了。 欢迎来和我讨论帮忙解决问题！欢迎提供新的方法（如此最好）！但凡有益，即发赏赐～  |
回复此楼» 猜你喜欢
RMC-6291怎么用？RAS(ON) 三重复合物工具化合物的实验室实操要点
已经有0人回复
-
苯并呋咱全解析：NBD 荧光衍生化试剂母核的化学特性与实验室应用
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有211人回复
-
生物质炭与活化剂氢氧化钾混合注意事项
已经有0人回复
-
科研人必读：新一代 KRAS G12C 抑制剂 Olomorasib 的研究进展
已经有0人回复
-
BT-11（Omilancor）研究化合物全解析：从分子结构到实验应用要点
已经有0人回复
-
富马酸贝达喹啉：二芳基喹啉类工具化合物的化学特征
已经有0人回复
-
BT投稿with editor状态快两周了，正常吗
已经有25人回复
-
Silevertinib（BDTX-1535）结构拆解：炔基双环片段为何成为合成瓶颈
已经有0人回复
-
RO4929097 解析：双苯并氮杂䓬骨架与 Notch 通路实验设计要点
已经有0人回复
-
分子量 1157 的 PROTAC 怎么配不析出：SGK3-PROTAC1 的溶解、分装与图谱复核
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
evangelina
无虫 (小有名气)
- 应助: 72 (初中生)
- 金币: -31.9
- 红花: 3
- 帖子: 135
- 在线: 58.4小时
- 虫号: 3180737
- 注册: 2014-05-05
- 性别: GG
- 专业: 病毒学
有时糊涂了抗生素用错
2楼2015-08-26 11:48:36
string1987
金虫 (小有名气)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 1174.3
- 散金: 25
- 红花: 3
- 帖子: 160
- 在线: 39.5小时
- 虫号: 825536
- 注册: 2009-08-10
- 性别: GG
- 专业: 发育生物学
3楼2015-08-26 12:47:19