| 查看: 1281 | 回复: 3 | ||
lvye3707金虫 (正式写手)
|
[求助]
pbi121 植物表达载体构建，连接后不长菌落
|
|
|
我将含酶切位点的目的片段（1500bp左右）放在pmd18 T载体（Takara）里，用Sac I和Xba I 酶切（这两种酶都是Takara 快速内切酶），50ul酶切体系： Xba I 2ul； Sac I 1ul； Buffer 5ul； DNA 5ul; 水37ul 酶切2h，70℃15min后，胶回收； 用T4DNA连接酶连接，10ul连接体系： T4 连接酶 1ul； buffer 2.5ul； DNA片段 3ul； 载体3ul； 水 0.5ul； 转化时 冰浴30min，42℃ 90s，冰浴2min，LB液体培养基 37℃ 摇至浑浊，涂板 50ug/ml Km抗性，12个小时后不长菌落 ，做了很多次了，可就是不长菌这是什么情况呢？ 照片 是 含正义/反应的T载体，pbi121载体酶切的情况和回收的情况，里面的是酶切的和原始质粒的对比  正，反酶切.jpg  P载体酶切 .jpg  P载体酶切 .jpg |
回复此楼» 猜你喜欢
推荐一些20种氨基酸检测的实际应用案例
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有126人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 植物表达载体构建求助啊，我打算用pBI121的，出现问题了。
已经有3人回复
- 目的片段和pMD18-T simple vector 的连接
已经有20人回复
- 原核表达载体的构建
已经有37人回复
- 构建pBI121表达载体，目的基因与载体连接不上
已经有54人回复
- 做酶切连接后转化再提质粒，质粒明显变小，Why???
已经有24人回复
- 构建植物表达载体pBI121带着GUS有木有影响啊
已经有9人回复
- 目的片段与表达载体的连接
已经有23人回复
- 双酶切连接表达载体，两个月都没做出来，问题到底出在哪里呢~？求指点
已经有52人回复
- 为什么我做的酶切连接总是不长斑呢？
已经有24人回复
- 【求助/交流】连接实验假阳性加多如何解决
已经有20人回复
- 【求助/交流】目的基因连接表达载体后涂板不长菌
已经有11人回复
yesali
木虫 (正式写手)
- 应助: 47 (小学生)
- 金币: 2168.6
- 沙发: 1
- 帖子: 643
- 在线: 127.4小时
- 虫号: 2233223
- 注册: 2013-01-10
- 专业: 植物遗传学
3楼2013-01-21 12:38:57
lvye3707
金虫 (正式写手)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 1290.9
- 散金: 482
- 帖子: 678
- 在线: 218.8小时
- 虫号: 1398903
- 注册: 2011-09-12
- 专业: 果树学
2楼2013-01-21 11:27:50
4楼2014-08-28 10:51:49
30