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lvye3707金虫 (正式写手)
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pbi121 植物表达载体构建，连接后不长菌落
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我将含酶切位点的目的片段（1500bp左右）放在pmd18 T载体（Takara）里，用Sac I和Xba I 酶切（这两种酶都是Takara 快速内切酶），50ul酶切体系： Xba I 2ul； Sac I 1ul； Buffer 5ul； DNA 5ul; 水37ul 酶切2h，70℃15min后，胶回收； 用T4DNA连接酶连接，10ul连接体系： T4 连接酶 1ul； buffer 2.5ul； DNA片段 3ul； 载体3ul； 水 0.5ul； 转化时 冰浴30min，42℃ 90s，冰浴2min，LB液体培养基 37℃ 摇至浑浊，涂板 50ug/ml Km抗性，12个小时后不长菌落 ，做了很多次了，可就是不长菌这是什么情况呢？ 照片 是 含正义/反应的T载体，pbi121载体酶切的情况和回收的情况，里面的是酶切的和原始质粒的对比  正，反酶切.jpg  P载体酶切 .jpg  P载体酶切 .jpg |
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yesali
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