| 查看: 6204 | 回复: 34 | |||
[求助]
双酶切为什么会切出来这么多条带？ 已有3人参与
|
|||
我是对质粒进行双酶切，用的是BamH I 和EcoR V这两个酶，采用20微升酶切体系。Marker 是15000的，四个样的双酶切目的条带在1650bp左右的位置，最右侧的一个是对照，对照质粒酶切下来的条带是400bp左右。为什么我得到的重组质粒双酶切会出现这么多条带的情况？该如何避免？单酶切一切正常。第二个图是单酶切。 双酶切1o 2016-03-10 21 时 05 分.jpg  EcoRV单酶切条带 5号112016-03-10 18 时 46 分.jpg |
回复此楼» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有172人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 请问为什么测序对了的重组质粒，双酶能切出其他条带
已经有10人回复
- 关于构建pET28a载体转化后IPTG诱导跑SDS-PAGE胶问题。
已经有25人回复
- 求分析琼脂糖凝胶电泳图
已经有4人回复
- 生工测序重叠峰交流
已经有8人回复
- 双酶切切出来三条带
已经有31人回复
- 质粒电泳问题
已经有12人回复
- 双酶切后载体片段变小
已经有8人回复
- （侯氏出品）双酶切连接反应之全攻略
已经有89人回复
- 关于酶切位点的问题
已经有3人回复
- 原核表达系统中提取质粒无超螺旋，什么情况，求解
已经有1人回复
- 【求助】AFLP选扩片段太大，酶切不彻底
已经有0人回复
- 关于酶切验证克隆的一点点小疑问！
已经有5人回复
- 【求助/交流】pcr、酶切问题，急！
已经有1人回复
- 【分享】质粒提取原理（转）
已经有13人回复
陈硕5楼2016-03-11 08:56:51
|
我们实验室自己重建的质粒。感觉我后期再加工加工可以做marker当商品卖了，到时候给你五折优惠，哈哈。我也不知道为啥，出发质粒好好的，要说双酶切咋会这么多长度区间都有条带呢？想不通，找不到原因。 发自小木虫Android客户端 |
10楼2016-03-11 17:56:28
|
会不会和你抽的质粒有关系啊，我们实验室之前就有同学抽质粒出现问题，双酶切时就出现好几条杂条带。后来重新抽了质粒再去双酶切就好了。 发自小木虫Android客户端 |
» 本帖已获得的红花（最新10朵）
14楼2016-03-12 00:22:54
|
如果担心你的酶切位点有问题，你可以在质粒那个酶切位点设计一个引物，将质粒拿去用引物测个序，就知道位点有没有问题了 发自小木虫Android客户端 |
» 本帖已获得的红花（最新10朵）
17楼2016-03-12 15:31:31
18楼2016-03-13 11:17:25
2楼2016-03-10 22:06:17
3楼2016-03-10 22:28:27
wang2568
银虫 (小有名气)
- 应助: 12 (小学生)
- 金币: 293.8
- 帖子: 76
- 在线: 55.8小时
- 虫号: 2134701
- 注册: 2012-11-19
- 性别: GG
- 专业: 肿瘤研究体系新技术
4楼2016-03-11 08:44:35
ken19860823
木虫 (正式写手)
- 应助: 21 (小学生)
- 金币: 3574.2
- 红花: 9
- 帖子: 875
- 在线: 107.4小时
- 虫号: 3150033
- 注册: 2014-04-20
- 性别: GG
- 专业: 免疫生物学
6楼2016-03-11 09:28:57
|
也是用这两个酶。好纠结啊，BamH I之前酶切不成功，感觉像是这个酶切位点出了问题。让我不明白的是就算那个位点出问题，那该怎么解释双酶切时出来这么多条带。这两天快被整疯了，想不明白。 发自小木虫Android客户端 |
7楼2016-03-11 14:53:17
8楼2016-03-11 14:54:28
ken19860823
木虫 (正式写手)
- 应助: 21 (小学生)
- 金币: 3574.2
- 红花: 9
- 帖子: 875
- 在线: 107.4小时
- 虫号: 3150033
- 注册: 2014-04-20
- 性别: GG
- 专业: 免疫生物学
9楼2016-03-11 15:45:45
40