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zhiqiang5070

木虫 (正式写手)

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[求助] 原核表达系统中提取质粒无超螺旋，什么情况，求解

pET28a/BL21 表达体系。测过序，正确。菌液PCR也正确。可是表达不出目的片段，后提取质粒，质粒浓度很低，而且木有超螺旋。这样能够表达出来吗？为什么会木有超螺旋呢？双酶切验证，又符合预期。
第一张图是质粒；
第二张图是酶切产物，目的片段1000bp左右，不是很清楚，但是有。

提取的含目的片段的表达载体

双酶切后产物

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无善无恶心之体

1楼 2012-02-21 10:21:52

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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

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【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1

抽提的质粒跑电泳1-3条带都是正常的，所以有没有超螺旋也是正常的，只要酶切正确就行。
基因克隆进去后能不能表达影响因素很多的：表达条件、外源蛋白毒性、读码框、RNA二级结构等等。

2楼2012-02-21 10:33:05

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