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zhiqiang5070

木虫 (正式写手)

[求助] 原核表达系统中提取质粒无超螺旋,什么情况,求解

pET28a/BL21 表达体系。测过序,正确。菌液PCR也正确。可是表达不出目的片段,后提取质粒,质粒浓度很低,而且木有超螺旋。这样能够表达出来吗?为什么会木有超螺旋呢?双酶切验证,又符合预期。
第一张图是质粒;
第二张图是酶切产物,目的片段1000bp左右,不是很清楚,但是有。

提取的含目的片段的表达载体



双酶切后产物
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无善无恶心之体
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
抽提的质粒跑电泳1-3条带都是正常的,所以有没有超螺旋也是正常的,只要酶切正确就行。
基因克隆进去后能不能表达影响因素很多的:表达条件、外源蛋白毒性、读码框、RNA二级结构等等。
2楼2012-02-21 10:33:05
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