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陈硕

铜虫 (正式写手)

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9楼: Originally posted by ken19860823 at 2016-03-11 15:45:45
大兄弟,你没发现EcoRV是平末端酶么?换一个其他的酶吧。...

实验室之前的师姐使用的,后续师兄使用也没啥问题,你看对照都好好的。到我这儿就有问题。

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11楼2016-03-11 17:57:15
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陈硕

铜虫 (正式写手)

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5楼: Originally posted by anjingde at 2016-03-11 08:56:51
BamH I 和EcoR V这两个酶的单酶切都是要做的,如果两个结果相差很大,可能是载体或者重组的基因里有其中一个酶的酶切位点

这个是BamH I 的单酶切结果,问题应该出现在这个地方。但是不明白就算是这个位点出了问题,那也不至于形成这么多条带啊····重组质粒以前没出现过这问题。
双酶切为什么会切出来这么多条带?
BamhI单酶切12016-03-11 21 时 14 分.jpg

12楼2016-03-11 21:31:03
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森林独行者

新虫 (初入文坛)

你先做个但酶切
13楼2016-03-12 00:02:45
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寻塔dadada

新虫 (初入文坛)

会不会和你抽的质粒有关系啊,我们实验室之前就有同学抽质粒出现问题,双酶切时就出现好几条杂条带。后来重新抽了质粒再去双酶切就好了。

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14楼2016-03-12 00:22:54
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陈硕

铜虫 (正式写手)

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13楼: Originally posted by 森林独行者 at 2016-03-12 00:02:45
你先做个但酶切

做过了,第二个图和第三个图就是单酶切。

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15楼2016-03-12 13:07:05
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陈硕

铜虫 (正式写手)

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14楼: Originally posted by 寻塔dadada at 2016-03-12 00:22:54
会不会和你抽的质粒有关系啊,我们实验室之前就有同学抽质粒出现问题,双酶切时就出现好几条杂条带。后来重新抽了质粒再去双酶切就好了。

嗯嗯,我再试试。

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16楼2016-03-12 13:07:23
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gmingwei102

新虫 (初入文坛)

如果担心你的酶切位点有问题,你可以在质粒那个酶切位点设计一个引物,将质粒拿去用引物测个序,就知道位点有没有问题了

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17楼2016-03-12 15:31:31
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hawkinghj

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
陈硕: 金币+5 2016-03-14 10:37:15
把空质粒和目标基因分别进行单酶切,逐步排除问题嘛!
这么多条带你不会是把marker,和buffer弄混了吧?

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18楼2016-03-13 11:17:25
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陈硕

铜虫 (正式写手)

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18楼: Originally posted by hawkinghj at 2016-03-13 11:17:25
把空质粒和目标基因分别进行单酶切,逐步排除问题嘛!
这么多条带你不会是把marker,和buffer弄混了吧?

问题应该是出在BamH I这个酶切位点上。我做这么多实验了咋可能弄混buffer呢,哈哈。

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19楼2016-03-14 01:33:43
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陈硕

铜虫 (正式写手)

送红花一朵
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17楼: Originally posted by gmingwei102 at 2016-03-12 15:31:31
如果担心你的酶切位点有问题,你可以在质粒那个酶切位点设计一个引物,将质粒拿去用引物测个序,就知道位点有没有问题了

通过几次酶切验证大致确定是哪里的问题了,谢谢啦!没法送金币,我就送红花
20楼2016-03-14 10:30:24
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