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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 双酶切为什么会切出来这么多条带？
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陈硕

铜虫 (正式写手)
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9楼: Originally posted by ken19860823 at 2016-03-11 15:45:45
大兄弟，你没发现EcoRV是平末端酶么？换一个其他的酶吧。...

实验室之前的师姐使用的，后续师兄使用也没啥问题，你看对照都好好的。到我这儿就有问题。

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11楼2016-03-11 17:57:15
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陈硕

铜虫 (正式写手)
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5楼: Originally posted by anjingde at 2016-03-11 08:56:51
BamH I 和EcoR V这两个酶的单酶切都是要做的，如果两个结果相差很大，可能是载体或者重组的基因里有其中一个酶的酶切位点

这个是BamH I 的单酶切结果，问题应该出现在这个地方。但是不明白就算是这个位点出了问题，那也不至于形成这么多条带啊····重组质粒以前没出现过这问题。
双酶切为什么会切出来这么多条带？
BamhI单酶切12016-03-11 21 时 14 分.jpg
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12楼2016-03-11 21:31:03
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森林独行者

新虫 (初入文坛)
你先做个但酶切
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13楼2016-03-12 00:02:45
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寻塔dadada

新虫 (初入文坛)
会不会和你抽的质粒有关系啊，我们实验室之前就有同学抽质粒出现问题，双酶切时就出现好几条杂条带。后来重新抽了质粒再去双酶切就好了。

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陈硕
14楼2016-03-12 00:22:54
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陈硕

铜虫 (正式写手)
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13楼: Originally posted by 森林独行者 at 2016-03-12 00:02:45
你先做个但酶切

做过了，第二个图和第三个图就是单酶切。

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15楼2016-03-12 13:07:05
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陈硕

铜虫 (正式写手)
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14楼: Originally posted by 寻塔dadada at 2016-03-12 00:22:54
会不会和你抽的质粒有关系啊，我们实验室之前就有同学抽质粒出现问题，双酶切时就出现好几条杂条带。后来重新抽了质粒再去双酶切就好了。

嗯嗯，我再试试。

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16楼2016-03-12 13:07:23
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gmingwei102

新虫 (初入文坛)
如果担心你的酶切位点有问题，你可以在质粒那个酶切位点设计一个引物，将质粒拿去用引物测个序，就知道位点有没有问题了

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陈硕
17楼2016-03-12 15:31:31
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hawkinghj

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
陈硕: 金币+5 2016-03-14 10:37:15
把空质粒和目标基因分别进行单酶切，逐步排除问题嘛！
这么多条带你不会是把marker,和buffer弄混了吧？
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陈硕
18楼2016-03-13 11:17:25
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陈硕

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18楼: Originally posted by hawkinghj at 2016-03-13 11:17:25
把空质粒和目标基因分别进行单酶切，逐步排除问题嘛！
这么多条带你不会是把marker,和buffer弄混了吧？

问题应该是出在BamH I这个酶切位点上。我做这么多实验了咋可能弄混buffer呢，哈哈。

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19楼2016-03-14 01:33:43
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陈硕

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17楼: Originally posted by gmingwei102 at 2016-03-12 15:31:31
如果担心你的酶切位点有问题，你可以在质粒那个酶切位点设计一个引物，将质粒拿去用引物测个序，就知道位点有没有问题了

通过几次酶切验证大致确定是哪里的问题了，谢谢啦！没法送金币，我就送红花
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20楼2016-03-14 10:30:24
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