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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 双酶切为什么会切出来这么多条带？
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陈硕

铜虫 (正式写手)

[求助] 双酶切为什么会切出来这么多条带？ 已有3人参与

我是对质粒进行双酶切，用的是BamH I 和EcoR V这两个酶，采用20微升酶切体系。Marker 是15000的，四个样的双酶切目的条带在1650bp左右的位置，最右侧的一个是对照，对照质粒酶切下来的条带是400bp左右。为什么我得到的重组质粒双酶切会出现这么多条带的情况？该如何避免？单酶切一切正常。第二个图是单酶切。

双酶切为什么会切出来这么多条带？
双酶切1o 2016-03-10 21 时 05 分.jpg


双酶切为什么会切出来这么多条带？-1
EcoRV单酶切条带 5号112016-03-10 18 时 46 分.jpg
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1楼 2016-03-10 21:36:39
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陈硕

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by anjingde at 2016-03-11 08:56:51
BamH I 和EcoR V这两个酶的单酶切都是要做的，如果两个结果相差很大，可能是载体或者重组的基因里有其中一个酶的酶切位点

这个是BamH I 的单酶切结果，问题应该出现在这个地方。但是不明白就算是这个位点出了问题，那也不至于形成这么多条带啊····重组质粒以前没出现过这问题。
双酶切为什么会切出来这么多条带？-2
BamhI单酶切12016-03-11 21 时 14 分.jpg
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12楼2016-03-11 21:31:03
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生科深似海

新虫 (小有名气)
先把质粒送去测序吧

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» 本帖已获得的红花（最新10朵）

陈硕
2楼2016-03-10 22:06:17
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岁月静好12

铁虫 (小有名气)
还有相同的酶切位点

发自小木虫IOS客户端
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» 本帖已获得的红花（最新10朵）

陈硕
怒放的生命
3楼2016-03-10 22:28:27
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wang2568

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
陈硕: 金币+5 2016-03-14 10:33:50
切成marker了，啥质粒这么牛!

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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4楼2016-03-11 08:44:35
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