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陈硕

铜虫 (正式写手)

[求助] 双酶切为什么会切出来这么多条带? 已有3人参与

我是对质粒进行双酶切,用的是BamH I 和EcoR V这两个酶,采用20微升酶切体系。Marker 是15000的,四个样的双酶切目的条带在1650bp左右的位置,最右侧的一个是对照,对照质粒酶切下来的条带是400bp左右。为什么我得到的重组质粒双酶切会出现这么多条带的情况?该如何避免?单酶切一切正常。第二个图是单酶切。

双酶切为什么会切出来这么多条带?
双酶切1o 2016-03-10 21 时 05 分.jpg


双酶切为什么会切出来这么多条带?-1
EcoRV单酶切条带 5号112016-03-10 18 时 46 分.jpg
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陈硕

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by anjingde at 2016-03-11 08:56:51
BamH I 和EcoR V这两个酶的单酶切都是要做的,如果两个结果相差很大,可能是载体或者重组的基因里有其中一个酶的酶切位点

这个是BamH I 的单酶切结果,问题应该出现在这个地方。但是不明白就算是这个位点出了问题,那也不至于形成这么多条带啊····重组质粒以前没出现过这问题。
双酶切为什么会切出来这么多条带?-2
BamhI单酶切12016-03-11 21 时 14 分.jpg

12楼2016-03-11 21:31:03
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生科深似海

新虫 (小有名气)

先把质粒送去测序吧

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» 本帖已获得的红花(最新10朵)

2楼2016-03-10 22:06:17
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岁月静好12

铁虫 (小有名气)

还有相同的酶切位点

发自小木虫IOS客户端

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

怒放的生命
3楼2016-03-10 22:28:27
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wang2568

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
陈硕: 金币+5 2016-03-14 10:33:50
切成marker了,啥质粒这么牛!

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
4楼2016-03-11 08:44:35
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