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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 双酶切为什么会切出来这么多条带？
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陈硕

铜虫 (正式写手)
送红花一朵
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5楼: Originally posted by anjingde at 2016-03-11 08:56:51
BamH I 和EcoR V这两个酶的单酶切都是要做的，如果两个结果相差很大，可能是载体或者重组的基因里有其中一个酶的酶切位点

谢谢您的建议，没法送分我就送红花了
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21楼2016-03-14 10:31:27
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陈硕

铜虫 (正式写手)
送红花一朵
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2楼: Originally posted by 生科深似海 at 2016-03-10 22:06:17
先把质粒送去测序吧

我筛选到正确的了，准备去测序
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22楼2016-03-14 10:32:06
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陈硕

铜虫 (正式写手)
送红花一朵
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3楼: Originally posted by 岁月静好12 at 2016-03-10 22:28:27
还有相同的酶切位点

我觉得就算是有相同的酶切位点，也未必会切出来那么多条带，我不知道为什么会这样。
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23楼2016-03-14 10:33:21
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陈硕

铜虫 (正式写手)
送红花一朵
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14楼: Originally posted by 寻塔dadada at 2016-03-12 00:22:54
会不会和你抽的质粒有关系啊，我们实验室之前就有同学抽质粒出现问题，双酶切时就出现好几条杂条带。后来重新抽了质粒再去双酶切就好了。

这个我重新抽提过了，还是同样的结果。BamH I这个位点可能有错误，是我筛选出了问题，现在已经筛选出正确的了！
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24楼2016-03-14 10:36:50
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陈硕

铜虫 (正式写手)
送红花一朵
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18楼: Originally posted by hawkinghj at 2016-03-13 11:17:25
把空质粒和目标基因分别进行单酶切，逐步排除问题嘛！
这么多条带你不会是把marker,和buffer弄混了吧？

谢谢解答，送朵红花     真的没有把marker和buffer弄混，感觉我做的质粒可以当marker了。
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25楼2016-03-14 10:38:24
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20081118129

新虫 (著名写手)

Drake
我也出现过，也许是你酶切位点有基因突变了吧

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26楼2016-03-14 15:55:12
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袁小伟

银虫 (初入文坛)
酶切之前是否有筛查过酶切位点，如果你的质粒上有重复多个的酶切位点的话都会被切开
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27楼2016-03-15 09:19:31
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爱萌的小天使

铁虫 (初入文坛)
你的问题解决了么？是因为酶切位点么？
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28楼2017-04-20 09:18:26
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enjoy大志

铜虫 (小有名气)
双切的时间过长，一般50ul体系，3h即可

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付出定有回报
29楼2017-04-20 15:56:28
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zwengmeng

新虫 (正式写手)
最近做实验，抽提质粒结果出现好多条带

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30楼2017-04-20 23:50:49
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