双酶切为什么会切出来这么多条带？ - 分子生物 - 生物化学

21楼2016-03-14 10:31:27

陈硕

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2楼: Originally posted by 生科深似海 at 2016-03-10 22:06:17
先把质粒送去测序吧

我筛选到正确的了，准备去测序

22楼2016-03-14 10:32:06

陈硕

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3楼: Originally posted by 岁月静好12 at 2016-03-10 22:28:27
还有相同的酶切位点

我觉得就算是有相同的酶切位点，也未必会切出来那么多条带，我不知道为什么会这样。

23楼2016-03-14 10:33:21

陈硕

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14楼: Originally posted by 寻塔dadada at 2016-03-12 00:22:54
会不会和你抽的质粒有关系啊，我们实验室之前就有同学抽质粒出现问题，双酶切时就出现好几条杂条带。后来重新抽了质粒再去双酶切就好了。

这个我重新抽提过了，还是同样的结果。BamH I这个位点可能有错误，是我筛选出了问题，现在已经筛选出正确的了！

24楼2016-03-14 10:36:50

陈硕

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18楼: Originally posted by hawkinghj at 2016-03-13 11:17:25
把空质粒和目标基因分别进行单酶切，逐步排除问题嘛！
这么多条带你不会是把marker,和buffer弄混了吧？

谢谢解答，送朵红花

真的没有把marker和buffer弄混，感觉我做的质粒可以当marker了。

25楼2016-03-14 10:38:24

20081118129

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我也出现过，也许是你酶切位点有基因突变了吧

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26楼2016-03-14 15:55:12

袁小伟

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酶切之前是否有筛查过酶切位点，如果你的质粒上有重复多个的酶切位点的话都会被切开

27楼2016-03-15 09:19:31

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你的问题解决了么？是因为酶切位点么？

28楼2017-04-20 09:18:26

enjoy大志

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双切的时间过长，一般50ul体系，3h即可

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29楼2017-04-20 15:56:28

zwengmeng

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最近做实验，抽提质粒结果出现好多条带

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30楼2017-04-20 23:50:49