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陈硕

铜虫 (正式写手)

[求助] 双酶切为什么会切出来这么多条带?已有3人参与

我是对质粒进行双酶切,用的是BamH I 和EcoR V这两个酶,采用20微升酶切体系。Marker 是15000的,四个样的双酶切目的条带在1650bp左右的位置,最右侧的一个是对照,对照质粒酶切下来的条带是400bp左右。为什么我得到的重组质粒双酶切会出现这么多条带的情况?该如何避免?单酶切一切正常。第二个图是单酶切。

双酶切为什么会切出来这么多条带?
双酶切1o 2016-03-10 21 时 05 分.jpg


双酶切为什么会切出来这么多条带?-1
EcoRV单酶切条带 5号112016-03-10 18 时 46 分.jpg
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陈硕

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by ken19860823 at 2016-03-11 09:28:57
你连接片段进去的时候是用的哪两个酶(或者哪一个酶)进去的,用的也是这两个酶么(BamHI 跟EcoRV)?

也是用这两个酶。好纠结啊,BamH I之前酶切不成功,感觉像是这个酶切位点出了问题。让我不明白的是就算那个位点出问题,那该怎么解释双酶切时出来这么多条带。这两天快被整疯了,想不明白。

发自小木虫Android客户端
7楼2016-03-11 14:53:17
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查看全部 35 个回答

生科深似海

新虫 (小有名气)

先把质粒送去测序吧

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» 本帖已获得的红花(最新10朵)

2楼2016-03-10 22:06:17
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岁月静好12

铁虫 (小有名气)

还有相同的酶切位点

发自小木虫IOS客户端

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

怒放的生命
3楼2016-03-10 22:28:27
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wang2568

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
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陈硕: 金币+5 2016-03-14 10:33:50
切成marker了,啥质粒这么牛!

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
4楼2016-03-11 08:44:35
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