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原味杂交的实验

a393941334
我在做原味杂交的时候DAB显色,为啥组织上总是有脏东西。洗不掉,是什么原因啊?
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请问转化大肠杆菌过程中需要加的LB培养液需不需要加含抗生素的

不二教主二
请问转化大肠杆菌过程中需要加的LB培养液需不需要加含抗生素的,如果不需要的话,加了含抗生素的有什么影响吗
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菌液pcr条带很淡

请教各位
请各位大神指教,本人克隆基因,切胶回收连接转化,摇菌后检测是否成功连接上,但是条带很淡,怎么办?连接16℃过夜12h,摇菌37℃,190转,时间大于2小时
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怎么让一个菌失去某个抗性?

snoopyzxx
现在在用一种不常用的格兰仕阴性菌做实验,该菌本身对卡那霉素、岸边霉素、氯霉素等都有抗性,导致我无法对其进行基因工程操作。而且该菌基因组测序数据没有。那么我用什么方法可以让该菌的抗性基因突变或者缺失呢?随机诱变方法可行吗?基因敲除的方法?但对一个不常规的菌,可以...
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求巨噬细胞raw264.7一株,坐标南昌

小懒团子跳跳
求巨噬细胞raw264.7一株,坐标南昌。因外地邮寄会导致巨噬细胞分化,故求本地高校或医疗机构raw264.7一株,本实验室有众多分子生物学相关仪器设备,有意者可考虑相关实验合作。
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NCBI提交转录组数据,题目和作者不用完全与打算发表的文章一致吧?

yghboy168
NCBI提交转录组数据,题目和作者不用完全与打算发表的文章一致吧?
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求 RNA capture sequencing 交流经验

非标签女孩
我最近在做RNA-seq的杂交捕获,重复两次试验,杂交完以后扩增12个cycle,第一次杂交投入量300ng,第二次杂交投入量500ng,最后得率第一次的很低,大概才有1.11ng/ul,第二次的很高有68.8ng/ul。以送上机测序,有人知道这个RNA-se...
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课题细胞及动物实验外包求助

ithinkican
请教各位虫友,本人课题需要做细胞及动物实验,想找公司外包,所以想问一下各位虫友,推荐几个比较好的北京地区外包公司。谢谢~本人课题为神经保护作用领域,需要脑缺血再灌注损伤模型大鼠、氧糖剥夺/复氧损伤神经细胞PC12等模型。谢谢各位虫友~
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CRISPR/Cas9基因敲入试验步骤--donor载体构建载体构建

lujiaoqia
1、质粒骨架的选择crispr/cas9质粒按编辑细胞类型可分为八种,mammalian、bacteria、drosophila、plant、c.elegans、yeas...
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cos7细胞转染失败

czbd2016
os7细胞用lipofectamine2000转染后测值与空白一样,两次都转染失败,没有数值。请高手们指点一二!
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pNPP为底物 酶活检测

胖成海hhhh
请教各位一些基础的问题,谢谢!我纯化的丝苏氨酸磷酸酶,以pNPP为底物检测酶活,由于蛋白是锰镁离子依赖,所以酶活检测buffer里含有10mMMnCl2,但是酶活反应最后会有白色沉淀产生,有没有人遇到这种情况?是不是因为pNPP反应产生磷酸根与锰产生的沉淀?但...
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关于蛋白纯化 谢谢!

胖成海hhhh
请教关于蛋白纯化的问题。请问各位蛋白纯化菌体破碎时(我用超声),加不加蛋白酶抑制剂cocktail?这个对蛋白活性影响大吗?我要纯化的是一种磷酸酶,蛋白酶抑制剂会不会影响它的活性啊?还请各位指教!多谢!
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以基因组DNA为模板扩增目的基因全长

小幸运哈
以基因组DNA为模板扩增目的基因全长,之前有一次提的DNA能扩出来,后来再新提DNA,提过好多次,同意的条件都扩不出来了,求帮助分析原因,附加你们用gDNA扩基因全长时用的酶是一般的酶吗
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【心得】引物设计重点考虑因素、设计技巧及引物设计软件推荐

lujiaoqia
最近合成了几十对引物,,在实战中多多少少有些心得,拿出来给大家分享。我感觉想把引物合成的比较好,除了前引物和后引物的Tm不能相差太大,我们还要重点考虑以下因素:一、GC%GC含量对于PCR反应来说GC含量在40%—60%,一般50%左右比较合适;而对于测序引物...
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实验技术及原理指南PCR/RACE/RNA-Sep

houtuizha
实验技术及原理指南目录一、dna实验技术01、动物基因组dna的提取02、质粒dna的提取03、dna的琼脂糖凝胶电泳04、重组质粒的连接、转化及筛选05、cdna文库构建06、变性梯度凝胶电泳07、southernblot原理及实验方法08、基因定点突变09...
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微量细胞提取RNA,trizol保存,如何合并提取

YY向前走
我有个问题请教一下提取方面专家:细胞数量是10^4数量级,每管是500ul左右透明的trizol保存,提取的时候觉得提取的RNA量达不到建库要求(按照每个细胞10pg的RNA量算,10^4级别细胞含的RNA达不到1ug建库起始量),所以将多达12管合并提龋提取...
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PCR退火温度求助

smjzzz
Tm值98摄氏度,GC含量65%,请问退火温度要多少合适?
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E.coli K12 MG1655中的pntAb基因在ncbi中检索不到

songxiawu
看很多文献中都从E.coliK12MG1655中提取pntAb基因片段,但我在ncbi中没检索到该片段基因。求助各位虫友,找到后能否发一个ncbi链接,谢谢了。
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我的MCF-7细胞怎么了!!

盲目的科研?
有哪位养细胞的大神帮我看看,我这瓶MCF-7细胞怎么了!谢谢
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DNAzyme订购遇到了问题

yang追梦人
在Takara订购时,DNAzyme中有rA,是鸟嘌呤核糖核苷酸,该怎么说明?
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solution1可以用来连接终载吗

大小z
宝生物的pMD™19-TVectorCloningKit中的solution1可以用来连接终载吗?反应体系是什么?连接时间是多少啊?求解答,谢谢大佬们。
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液态商品纤维素酶跑SDS-PAGE,条带总是不清晰

wangqunlin
商品纤维素酶跑SDS-PAGE,样品直接稀释之后上样,条带总是不清晰,该怎么解决呢?求指点,多谢!图片1.jpg
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乳腺癌21基因复发评分值

0010030335
各位大神,请问谁知道文章中所描述的基因表达的标准化是如何计算的?为什么标准化后的值在0-15之间?感谢。Therecurrencescoreonascalefrom0to100isderivedfromthereferencenormalizedexpress...
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刚开始用biacoreX100仪器,出现了许多问题不懂,望大神求教

CeciliaLou
我刚开始用biacoreX100,在CM5芯片上偶联了一个带正电的蛋白,然后没做几次实验之后发现KD的值变得很大,不知道是不是芯片上的蛋白失活了的原因,因为没有做过几次实验所以有点不敢相信是失活了,请各位大神指点也可以联系我的扣扣992610247,有不懂的问...
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感觉结果怪怪的

墨竹韵
恳请路过的各位指导,如图是胶存在问题还是操作的问题
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全网独家—Q-PCR实验技术资料

mayatang2
(1)实时荧光定量pcr(qpcr)技术简介(2)实时荧光定量(qpcr)技术简介(3)rt-pcr(4)rt-pcr.docx(5)(5)qrt-pcr原理与应用-早期...
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ROS活性氧捕捉

wudixuanfeng
用钛铁试剂捕获活性氧,超氧阴离子的文献?谁有,能不能分享一下
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是模板问题,还是操作问题

JOMI
我前几天提取的rna,测了浓度在3000-4000左右,电泳图如下。提的rna蛋白污染很小,但是盐污染严重,我用rna做逆转录,得到的cDNA为模板,为了验证我得到的模板...
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质粒提取出现问题求解决

轩辕漪
最近提取质粒出现杂带,电泳显示大小在10000bp以上,长时间摇菌会积累质粒酶切之后,这个条带不能被切开摇菌之后有酸臭味,应该是一种污染,杂菌污染(但培养基静置几天不见污...
分子生物
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真菌基因敲除验证

an安琳
请问有没有遇到过真菌基因敲除转化子验证时既能p出原片段又能p出同源臂上游?抗性基因的片段啊呈现不完全敲除的特征该怎么办呢谢谢谢谢
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