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DNA引物的5`端和5`能退火形成双链吗

maye1951
DNA引物的5`端和5`能退火形成双链吗
分子生物
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过表达载体测序

灯火阑珊0818
构建过表达载体,pcDNA3.1(-)作为载体,过表片段长度是672bp,Amp作为抗生素,使用的感受态是DH5a,挑取单个菌落,37°C,220转摇菌12h,自己做了菌液PCR,可以跑出目的条带,但是有的有杂带有的没有杂带,总共选择七只送出去测序,但是最后反...
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PCR扩增小鼠抗体VH基因条带弱怎么办?

微1123
各位大神,我是研二的学生,我最近在用PCR法扩增小鼠抗体的重链可变区基因,其中上游引物有简并碱基,之前有条带,但是很弱,后来跑的核酸电泳只有引物二聚体,没有目的条带了,用之前相同的PCR程序也不行,求各位大神可以指点我一下PCR程序如何设置吗?谢谢啦!
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植物使用kiwellin蛋白质(猕猴桃中一种蛋白)对抗真菌

欣贝莱生物
真菌感染会影响作物产量。发现可抵抗真菌诱导的宿主代谢干扰的植物蛋白可以阐明抗真菌防御和抑制代谢酶的机制。在植物中引起疾病的生物(如真菌)通常会分泌有助于宿主生长和繁殖的蛋白质。这些被称为效应蛋白,并且一些是解除调节的代谢酶,其操纵植物中的关键代谢途径。Han等...
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请教:荧光定量PCR相关问题

Cherishqj
大家小年好!给各位虫友拜个早年呀,本人年后要做qPCR实验,老师要求在假期写好实验方案,查阅了RT-qPCR相关资料,仍有一些问题不太清楚,希望大家帮忙解答一下。首先我做这个实验是为了确定该基因在两种不同条件下的表达量,所以选择相对定量的方法,实验步骤分为提取...
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反转录制备cDNA

Cherishqj
以RNA为模板制备的cDNA是单链的,接下来要做荧光定量PCR,需要以cDNA为模板合成第二链吗?如果不需要的话那qPCR的模板就只有一条链,设计目的基因和内参基因引物的时候只设计一个引物吗?我觉得有点怪怪的,不知道我什么地方理解有问题,希望能有详细的解答,真...
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PCR片段可直接用于细菌的基因敲除吗?

实验室小白
请教大家,做细菌的基因敲除,可不可以用上游同源臂+抗性基因+下游同源臂用overlapPCR之后直接把PCR片段转入细菌,就不重构质粒了,这样可行吗?先谢过各位大神了!
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唾液基因组DNA提取

cxkhhh
要从唾液和漱口水中提取基因组dna进行后续的研究,不知道用哪个试剂盒提取,拜托大家给推荐推荐
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得到的DNA测序结果有一个碱基有错应该怎样分析

MJBZ
上课时,老师出了个题,一个DNA测序文件,在第77位机器测定为C,但是下面的峰可以认为是G,根据学到的一点皮毛,我把C碱基翻译成蛋白质,把G碱基的翻译成蛋白质,用DNAstar软件分析序列,发现这一个碱基变化,导致翻译成两个氨基酸残基,一个组氨酸一个苏氨酸好像...
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问一下对于间充质干细胞,转染方法的选择

Carrot1990
打算做干细胞方向的,在转染的方法上比较纠结,目前想在电转染和慢病毒转染之间做选择,想问一下这两种转染方法对于干细胞转染来说优缺点如何,还请各位大神指教
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巯基氧化酶酶学测定

Anti-angle
巯基氧化酶可以氧化自由巯基成为二硫键,我用还原态的溶菌酶(有自由巯基)做底物来测定酶活性。但是每一次都是刚加入酶的时候数据有一个变化,之后就不变了,好像酶刚放进去发挥了一下作用之后就不起作用了……我测酶活的体系是有2M尿素,是不是含量太高了酶失活了,但是很多文...
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质粒大提浓度定量不准确

feisecret
本人用OMEGA质粒大提试剂盒抽提pCHO1.0载体质粒,Nanodrop测定浓度600ng/μL左右,A260/A280值为1.88,A260/A230值为2.80,但是琼脂糖电泳检测条带很淡,只有正常亮度的十分之一左右;同样的试剂盒抽提pFUSE载体质粒,...
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唾液基因组DNA提取

吃瓜的半仙
求推荐试剂盒用于临床唾液样本的基因组dna提取,后续用于pcr及snps的分析?感谢![Lasteditedby吃瓜的半仙on2019-2-21at11:42]
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灰霉菌基因组数据库

lele86hao
请问有灰霉菌基因组数据库吗?能给个地址吗?
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自学生信 举步维艰

夏希9369
自学生信,真的是举步维艰。一个Ubuntu的root权限死活弄不好,,?^?,,举步维艰
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请前辈解释测定炎症因子和测定其对应的mRNA含量的区别

liuliu80410
我看完文献的感觉是,由于待测因子不能用ELISA方法检测出来,才通过检测其对应的mRNA含量来表征这个炎症因子可能要受到或者已经收到影响,只是还不大。请前辈告知我这个理解对吗?如果错了,怎么看待文献中有的炎症因子测定的是因子本身而有的因子测定的是mRNA。感谢
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GFP和LUC荧光信号会干扰吗

consist10
慢病毒表达系统,骨架质粒含有LUC荧光信号,表达质粒还有GFP,在构建假病毒时,LUC和GFP会有荧光信号干扰吗?谢谢。
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弱弱请教一个问题:有“基因的磷酸化”之说吗?

cjn288
分子水平的检测时有磷酸化之说,比如ERK和p-ERK,Rb和p-Rb,p53和p-p53;甚至有的文献中出现“磷酸化蛋白(酶)再次磷酸化”(磷酸化位点一般不同),那么对应地,基因水平的检测,也应该有磷酸化之说啊,但是我几乎没有在文献中看到。难道真没有“基因的磷...
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酵母(非模式菌株)容易做基因敲除、和过表达吗?

薄荷000清香
酵母(非模式菌株)容易做基因敲除、和过表达吗?初入者,不太懂,想知道大概多久能做出来youlinglyw
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希望有前辈能助我上研究生

蕭堅
今年考研没考好,估计只能去b区调剂了,还请各位小木虫的前辈们帮我指导一下,如果有哪位知道有调剂信息的,也劳请告知我一下,我在这里谢谢大家了!可以私聊我,我微信xc95963274,qq1253310170,谢谢大家了,小弟我本科毕业于中医药大学,报考的是中科院...
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关于生物学电路和基因电路

嘚-嘚
求助各位大神,基因电路(genecircuits)和生物学电路(biologicalcircuits/biocircuit)有什么区别啊?本人乃刚入这方向的小白,还望大神们指点啊?
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求助一下各位大佬western blot

xinglanyao
是这样的我在公司定做了两个蛋白的抗体,各十个,拿到之后就开始用原核表达的蛋白验证,可是三四次了也没有做出来,我每次抗体稀释的倍数基本都是1000倍左右,不知道问题出在哪?希望有做得多的朋友可以指导一下,感激不尽!谢谢
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路过的大神们救救我~

之陌
分子实验小白一枚,刚进实验室一脸懵,自己学习了各种理论知识,做实验的时候还是遇到各种问题,师兄师姐们总是有自己的事情要做,没有人带,好崩溃啊,有经验的师兄救救孩子吧微信Momoai2223
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关于提取人体血清中的RNA问题-

宇宙小妖怪
最近计划提取人体血清中的RNA,后续会逆转录CDNA,然后进行PCR荧光定量实验,请问提取血清中的RNA就用TrizolLS?还是用其它,大家有用过有什么方便效果又好的试剂盒吗?指点下!
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不管怎样连接,转化后不长菌。

lindashan
连接卡着了,是CRISPR的质粒构建。插入片段很小只有24bp包括4bp的粘性末端,是由公司合成的互补片段退火而成的,是否退火成功没法检测,只能测浓度大概为1200ng/ul。载体为BsaI酶切过后的线性化质粒,酶切胶回收大小正确,有较为清洗的条带,只是浓度很...
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急求PCPXG418质粒

小巷听雨
大家好,目前我正在对一株菌进行基因组挖掘操作,需要用具有G418抗性的质粒为载体,目前想问下哪个实验室有这种质粒啊,有的话希望可以联系我。谢谢
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急求拟南芥突变体aux1-7

zl_real
急求拟南芥突变体aux1-7材料,在国外买了几次都没有收到,被海关给拦了。希望各位大佬提供帮助。谢谢
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实际血液样本的获取

CFY809539
想要做实际血液样本中的DNA检测,近期想要采购血液样本,但是好多公司只是卖血清,并不提供血液样本,或者可以合成实际血液的完整组分。有没有做相关研究的,提供一些经验。
分子生物
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