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链霉菌工程菌传代后抗性标记丢失

落日余晖34
采用同源重组和位点特异性整合构建的链霉菌敲除和过表达突变体,在无抗斜面上传3-4代后转接无抗和有抗的液体培养基进行验证时发现,不添加抗性的情况下,无法P出抗性标记,而添加抗性的情况下能够p出抗性标记,按道理说整合到基因组上应该不会再掉下来了吧,怎么传代以后抗性...
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植物总RNA提取

zing秋
提取植物总RNA,所用样品是两种不同的植物,按照RNA提取试剂盒的步骤操作,第一步是把叶片研磨,所用的研钵在使用前需进行高压灭菌。我的问题是,研磨完一个样品后,在研磨第二个样之前,研钵是否还需再次进行高压灭菌?如果需要,那有没有什么其他研磨方法可以使样品间互不...
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真菌基因组DNA经PCR扩增

lucifer晗
扩增后跑凝胶电泳,条带非常暗。应该如何解决?
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电泳结果不佳,泳道亮,marker歪歪扭扭的。

Echov10
从左到右依次是2000+的marker,阳性对照,样本,上下为不同公司的marker电泳液换新的试过,胶也都重新配过,还是这样,电压90,电流60,时间40分钟,2%的琼...
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PNQ705酶切,连接总是不成功

零的开始
PNQ705质粒采用Xba1和Sal1酶切,酶切后连接片段,转到DH5α中,总是不成功。总是找不到连接后的片段,有没有遇到此种情况的。我是打算敲除弧菌的一个基因。
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求问ntsys计算的遗传距离为什么都大于1

exia14981
用的是similarity模块的geneticdistance是系数选择的不对吗
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PKSV7敲除溶藻弧菌基因可行不

零的开始
大家有用PKSV7敲除弧菌上面的基因的吗?有成功的案例吗,之前用的质粒PNQ705,连接总是不好,所以就想换个质粒转化效率可能会高一些
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westrn各个英文标识请教

boss88
western小白请教,图中的IP、IB和INPUT都代表什么?微信图片_20200108085918.png
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ISSR 01矩阵分析

吃栗子的鱼
ISSR01矩阵怎么去看位点。我有25个地区,每个地区5份DNA,有12个引物,每个引物都进行了扩增。我想问下,我最后要输入01矩阵的时候,是把所有的DNA扩增的结果一起分析吗。那样可能有特别多的位点。还有分子量多少范围内可以算成一个位点呢。我现在只对3个地区...
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谁在生物信息的博士群???求带

Dorasheng
谁在生物信息的博士群???求带
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土壤,18SrDNA和ITS区别

SUNluckv
求大神指点,想做绝对定量pcr,得到土壤中真菌丰度,拷贝数,但不知道是用18SrDNA的通用引物还是ITS区的引物,这两个有啥区别,之前做过ITS区的pcr,用的引物是ITS1和ITS4,但是老有非特异性扩增,现在想做18s,但是发现18s的资料比较少,想知道...
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RNA free的枪头是否能代替普通枪头使用?

追问恍然
请问RNAfree的枪头(tips)和普通tips的区别是?普通tips使用前需要灭菌,而RNAfree的tips使用前没有灭菌。RNAfree的tips是否能代替普通tips使用?
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小白咨询Chip相关问题

汤汤圆
请问做Chip试验,必须要培养细胞吗?我的实验材料是昆虫,可不可以直接研磨昆虫然后进行交联反应?
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蛋白可溶性表达 无活性

yedansky
有没有可能大肠杆菌在OD6000.4-0.6诱导时,少量表达的可溶性蛋白有很高的活性但OD600值在0.7-0.8或者更高,虽然为可溶性表达,但是无活性,有人有这种情况么
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求助转录组测序完成后,基因克隆引物设计问题

婉柳
课题组做了转录组测序,从测序库里找出来了一条拼接的基因序列,大概有1000bp,基因克隆的时候,是直接拿着拼接出来的序列在primer5里设计吗?
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双酶切法链接目的基因到质粒

食科,调剂
选择酶切位点的时候,要分析目的基因存在的人酶切位点,哪个个网站比较好,我用https.//www.genscript.com/tools.html分析的结果太多了,有什么好办法可以筛选得跟方便一点
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16S rDNA鉴定结果

hxw19961228
我就是做个鉴定,把生工给的拼接结果在ncbi进行了blast对比,结果是这样的,我想问下我的菌是第一个名称呢还是后面有个100%的枯草芽孢杆菌,但是这个枯草periden...
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转录组数据如何分析

hly英子
请问下各位圈内的伙伴们,怎么通过转录组数据分析查找到相关通路的基因家族?就比如相关碳水化合物活性酶家族基因怎么找到呢?如果有会的麻烦帮帮忙;谢谢每一位路过看到的虫友,新年快乐,新年好运!
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多克隆抗体使用问题

never低调
请问大家,可以做ELISA的多克隆抗体和不能做ELISA的多克隆抗体有什么区别?
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CRISPR/Cas9的问题

lzk234
请求各位大佬给小弟解答,最近在大肠杆菌(BL21(DE3))中做Cas9,每次电转第一个Cas9质粒很正常,但是电转第二个含有sgRNA的Target质粒后涂板总是不长,请问各位大佬这是什么原因。
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2-乙酰乳酸合成酶

独家记忆fm
有虫友测过细菌的2-乙酰乳酸合成酶的酶活吗?我按照文献的做法,在酶液反应后加入硫酸终止反应,此时反应体系突然变成淡粉色,取脱羧后的酶液与肌酸和萘酚反应,颜色没有任何变化,请问是我的菌体内没有这种酶还是怎么回事啊?求做过2-乙酰乳酸合成酶的虫友指点,万分感谢!!...
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如何快速的从文献中获得对一个陌生领域的了解?

想上研究生。
刚开始了解一个全新的领域,如何更有效的阅读文献?
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毕赤酵母电转化,PCR问题求助

melon熊熊
实验流程:1.将目的基因-ppicZaA进行线性化,切胶回收。活化GS115并用预冷的水和1M山梨醇制备感受态。2.将酵母感受态放在预冷的电转杯中,加入线性化质粒以150...
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HPLC标品浓度单位换算

Anna三水
背景:现在用的不同微摩尔浓度的标品,我们想要计算产物的峰面积,就需要先用这不同浓度梯度来做标准曲线。问题:如果我想让纵坐标是毫克单位,我只需将所有的微摩尔浓度除以1000换算成毫摩尔,然后在乘以相对分子质量是不是就可以了?举例说明:比如我是5微摩尔,10微摩尔...
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植物细菌分泌蛋白

青萍之沫
请问有谁做过植物细菌分泌蛋白吗,有个问题想请教一下,谢谢。
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蛋白表位预测软件BepiPred-2.0使用交联

工大小僧
各位大神好,小弟从上IVD行业,有个软件一直不会使用,特请教各位大神。问题:在使用BepiPred-2.0在线软件进行蛋白抗原B细胞表位预测时候,经常遇到下面问题,请问是什么原因?1581407281(1).png
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甲基化部分的原理问题,求大神回复

子藤093
1.C位点覆盖度统计原理2.sequencingdepth和sequencingcoverage的区别与联系
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宏基因组学研究—宏基因组Reads的组装与分类/分箱

remax520
1.高通量测序是探索宏基因组学研究的一个工具1.1与参考基因组进行Mapping来重构宏基因组Reads许多微生物未被分离,数据库中无相关信息;利用宏基因组Reads与当前已知数据库进行比较分析,可以对数据产生新的理解;已测序的基因组是宏基因组Reads来源确...
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如果导师一直不让做实验,学生该怎么做才能毕业?

re_i
这是之前发生在我身上的事,但事后我仍然不知道该怎么做。或者说,再碰上类似的事,我还是不知道怎么办。事情简而言之就是,导师把明知是错的基因序列给我用来做实验后,因为pcr做不出来,就拖一年多都死活不给其他实验,等于是不让我做实验。那研究生有要求做实验的权力吗?这...
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请问PE诱导和AngⅡ诱导心肌细胞有什么区别呢?

如萤映雪
请问PE诱导和AngⅡ诱导心肌细胞有什么区别呢?
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