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核酸检测实验中如何防范气溶胶污染

小小书虫飞
科研和临床检验场所PCR分子实验使用频率较高,PCR实验怕出问题了,当PCR出现假阳性的时候,我们常常会考虑是不是引物、试剂、Mix、模板、水等发生了污染,然后逐一排查,有时还是找不到原因,耗时耗力。那么这些试剂和仪器到底为什么会被污染了呢?其实有很大因素是核...
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native-page 条带太奇怪了,求助大佬帮忙分析!!感谢!

juew
各位大神,为啥我的DNA跑出来最下面有条长两条带啊?好几次重复实验都是这样。之前没用marker的时候没有,自从开始用marker之后就这样了,不知道是不是marker的原因,就感觉很奇怪。marker跑出来条带的也不太好。另外,我这个DNA样品分子量是从25...
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求助thp1和Raw264.7细胞,可以互相细胞

陈奎达
最近一直在做免疫细胞实验,需要这两种细胞,谁可以馈赠一些嘛?万分感谢,或者可以互换细胞
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RPA重组聚合酶扩增

1303675733
RPA重组聚合酶扩增速度快的原因及其原理是什么?求!
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求助帖:质粒提取摇菌失败求助

Sily2020
新手第一次做质粒转化,挑菌、提取,做的是PNL-4-3这个质粒,转化使用热激法,质粒+感受态细胞stbl3结合冰浴30min,热激90s,在冰浴2min,加1ml的无抗LB培养基,摇1h,取10ml菌液铺固体培养基,虽然长菌挺密,但可挑出单菌落,然后10ml有...
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共聚焦细胞不平整有很多小泡

ZPGaptamer
A549细胞状态还可与无毒性样品孵育固定30min(也尝试15min)后洗三次10min/次,拍的时候总是发现细胞膜不平整有很多小泡,而不固定的话就没有很明显,有遇到相似情况的虫友指教下谢谢~
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上海交通大学精准医学研究院曾汉林课题组2021诚聘肿瘤生物信息学科研人员及博士后

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上海精准医学研究院是上海市教委IV类高峰学科建设项目,由上海交通大学医学院牵头、依托上海交通大学医学院附属第九人民医院进行实体化建设的上海市科技协同创新中心,研究院位于浦东新区锦尊路115号的上海交通大学医学院附属第九人民医院九院科教园区,于2017年12月2...
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重组酶酶活测定

JH5HJ
使用pGEX-4T-1载体与我的目的基因重组,在大肠BL21中表达我的酶,破碎后去上清,测酶活,现象非常奇怪,上清与底物混合后不用反应就可以得到产物,而且灭活组是没有的,跑了SDS-PAGE在目的区太多杂蛋白无法区分,想问问大家这个上清中有没有可以某种物质可以...
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求助原核表达载体pCold-TF

一星子剪影
各位虫友,谁有pCold-TF表达载体,能否赐一点?因为一个蛋白在pET,pGEX系列载体都不能表达,而最近一篇文章中通过pCold-TF表达该蛋白,所以想尝试用这个载体表达试一试。谢谢各位虫友,有的话能否赐一点~最后祝各位虫友实验顺利,新年快乐~
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表达的蛋白质用tev酶切割后,目标蛋白无法与原蛋白分离

lostunit
表达的蛋白质用tev酶切割后,目标蛋白无法与原蛋白分离
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含2个连续脯氨酸的蛋白表达问题

落日余晖34
楼主最近用bl21(de3)表达一个含有连续脯氨酸的蛋白的时候发现,一经iptg诱导,相比于不诱导会生长的很差,蛋白电泳显示也没有我的目的蛋白,把这两个脯氨酸用pcrp掉之后又表达正常了,有虫友遇到这种情况吗?网上也没有这种情况报道呢……
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CRISPR-Cas13a蛋白求购

落雨sjh
CRISPR-Cas13amediatednanosystemforattomolardetectionofcanineparvovirustype2ChineseChemicalLetters2019,Vol.30Issue(12):2201-2204这篇文...
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构建过表达载体,基因CDS大片段缺失

Gsjsh
大家好,我最近想构建一个基因的过表达载体。从CDS中PCR该基因(3100bp),条带单一,大小正确,回收的基因片段测通,序列正确。但是我用同源重组的方式,将基因片段连接到慢病毒载体上,转化后酶切验证,发现插入片段只有1000bp左右,测序也发现中间有2000...
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重叠延伸PCR目的条带纯化后扩增依然是非特异条带

加油小小帅
最近做重叠延伸PCR连片段,一直有非特异扩增,单独将目的基因切下再做pcr还是非特异扩增,我是三个片段连接,这个非特异好像是两端的连上了中间的片段的非特异小片段,做过很多次稀释,也做过巢式PCR,还有不断的纯化,都只是p出那条非特异,各位大神有什么建议?纯化过...
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RBS+第一个蛋白(有终止密码子)+第二个蛋白(有终止密码子),会正常表达吗?

小汰宝
想构建2个蛋白在pet28a载体上。序列大概是:T7启动子——RBS——第一个蛋白(有终止密码子)——78bp(血清酶切割位点和T7tag)——第二个蛋白(有终止密码子)第二个蛋白前是没有RBS的请问这样第二个蛋白能正常表达吗?还是第二个蛋白表达量会少一点?还...
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请教:qRT-PCR验证RNA-seq的结果

erxiaobio9933
在很多文献中,用qRT-PCR验证RNA-seq的结果中,往往是qRT-PCR有误差线(errorbar)而RNA-seq没有,这不是个例,很多文献的图就是这样的。我贴了几个文献的截图,但是这些文献表明进行测序都是至少三次生物学重复的,所以没有误差线肯定不是因...
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请教双敲除小鼠的繁殖方法

张文将
各位虫友,本人想用两种敲除小鼠杂交繁殖,构建双敲除小鼠,不知群里是否有这方面经验的朋友,求指教,定重谢,我的QQ1126372680
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连接转化的时候,去磷酸化吧什么都不长,不去磷酸化吧长不少全自连

天使的茶
连接转化的时候,质粒酶切后,去磷酸化吧什么都不长,不去磷酸化吧长不少全自连。做了3多个月了,都是这个结果。所有试剂材料都排除过,没有问题。请问大侠们有没有好建议啊!!!!
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求助关于TGF-β/SMAD3通路

pgju2108
请教下大家,TGF-β/SMAD3/胶原蛋白这个通路中,上游TGF-β↑/中游SMAD3不变→/下游胶原↓,这该怎么解释得通呢?在努力憋讨论
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求乳酸乳球菌NZ3900与质粒pNZ8491

啊药梁
本人的实验需要乳酸乳球菌NZ3900与质粒pNZ8491,哪位大神手上有可以赠送或者交换或者购买吗,请答复或私聊我,谢谢!!
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自己制备Taq酶了

lllilei1986
大家好,我是从事分子生物学的,最近准备去新公司,给我的任务是查找市面上Taq酶的种类,这个很好查找,但是要找到销量比较高的公司,这个比较难,我在百度上查找一番没有找到,有知道的大神吗?急需急需,另外我还想咨询一下,现在市面上做的Taq酶是含有832个氨基酸的那...
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招聘蛋白表达纯化、结晶实习生

booox
青云瑞晶的结构解析平台自拥有MicroED专用的透射电子显微镜、蛋白质表达纯化、结晶等一批先进实验室设备。'https://www.readcrystal.com/'公司目前有实习的职位,欢迎感兴趣的同学加入,实习完后,双方满意的话可以留在公司继续发展。实习岗...
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药物作用机制揭示应该从哪个组学入手呢?

yongxiu2008
研究一个药物对细胞信号通路的调控作用,如果对具体信号不是很清楚,这个时候从组学入手,是应该先进行转录组学开始研究吗?
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请问同一个基因的gene id 和 genebank号有什么区别?如何选用呢?

loveskyzhou
请问同一个基因的geneid和genebank号有什么区别?为什么要用两个?如何选用呢?比如genebank:NR_027341和geneID:158314
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转录因子及其下游靶基因

王丽媛西西西
想问大家一个问题,A是转录因子,B是与其互作的下游靶基因。。那么,我想问,做A的过表达或沉默株系,B的表达量一定会发生变化的,是吗?那么这种变化是如何的,A过表达,B表达量提高还是下降;A沉默,B表达量提高还是下降?我还想问,做B的过表达或沉默株系,A的表达量...
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相对定量还是绝对定量分不清楚,跪求问题,重赏!!!

sweet5210
跪求请问这段话描述的到底是相对定量pcr还是绝对定量pcr,在网上查了很多资料说相对的不需要标曲,想像他一样获得细胞中mRNA的含量完全不知道什么意思,不做这个相关的,只想要这一小部分数据,跪求回答,快毕业了好头疼。“通过测定controlRNA(在Rever...
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无半胱氨酸培养基

风思雅
最近开始铁死亡相关的研究。但是看到论文里的半胱氨酸饥饿处理,但是翻了好几篇论文也没看到相应的培养基货号,因此想问大家有知道不含半胱氨酸的细胞培养基是怎么配置的吗?还是有现成的培养基可以购买呢?
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质粒复制子替换问题

H研T
各位虫友好:由于发现某个p15A的质粒难以消除,所以本人想将p15A复制子替换为pSC101温敏性复制子便于消除。不知道这种策略行不行?只将相应的序列替换掉会不会影响这个质粒其他功能呢?
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求赠求赠野生型酵母菌株INVSc1

sunjiutong
求赠求赠野生型酵母菌株INVSc1,可交换质粒或其他菌株。
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应助之星
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