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20kb+的大片段回收问题

kangaroo0513
哪位做过20kb+的大片段回收,求点经验。百度了下,推荐的方法中,试剂盒类的主要是基于玻璃奶的(Omega的、Qiagen的QIAEXII、Roche的AgaroseGelDNAExtractionKit),除了omega的玻璃奶,另外两个都不便宜,所以先来求...
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求293T细胞培养方法

Stem cells
近期细胞总是聚在一起,明明消化是分开了,但是一会就会聚在一起,细胞圆而伸展不好,且细胞容易发黑,有人说是因为消化了的原因,说293不用消化,消化了反而不好,且传代密度有要求,有没有人帮忙解答一下,新虫,万分感谢
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请问做pi单染测细胞周期的同学,每次固定之后用pbs收细胞,细胞消失怎么回事

HX91926
按网上的步骤,按试剂盒的步骤都试过了。先胰酶消化,然后终止消化,离心收集细胞,用预冷pbs清洗(也用过没预冷的),收集细胞。再用400微升预冷pbs重悬细胞,然后滴加1200微升预冷乙醇(也试过反过来滴加),然后四度过负二十固定然后离心,能看到细胞沉淀,并不像...
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用于表达目的基因的慢病毒载体

芥末本绿
在实验中有哪些常用的用于表达目的基因(不是发挥干扰作用)的慢病毒载体?
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普通PCR扩增重复性差

whutseu
以纯化细菌的基因组DNA为模板,扩增目的基因,然后琼脂糖凝胶检测,同一模板,不同批次做时,有时有条带,有时无条带。比如,一批样品,是否含有目的基因未知,第一次做时,有几个可以扩增出来,第二次做时,第一次有条带的可能就没有了,第一次没有条带的第二次反而跑出了目的...
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Western(需要有经验的人士)

Stem cells
亲们做Western,有没有特别权威的protocol,连带有详细的注意事项的那种,刚刚接触这个,关于根据分子量选择转膜时间有没有一个详细的标准,我做的蛋白350KD,万分感谢,
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分子克隆实验指南(上册)—(美)M.R.格林等主编主编贺福初主译2017.3出版

lwjxz
分子克隆实验指南(上册)—(美)M.R.格林等主编主编贺福初主译2017.3出版内容提要分子克隆技术30多年来一直是全球生命科学领域实验室专业技术的基矗冷泉港实验室出版社出版的《分子克隆实验指南》一书拥有的可靠性和**性,使本书成为业内*流行、*具影响力的实验...
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求解转录组做什么的

zhao_shujing
人们所说的做转录组一般都是做什么的啊?主要都什么内容?
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分子克隆实验指南(中册)—(美)M.R.格林等主编主编贺福初主译2017.3出版

lwjxz
分子克隆实验指南(中册)—(美)M.R.格林等主编主编贺福初主译2017.3出版内容提要分子克隆技术30多年来一直是全球生命科学领域实验室专业技术的基矗冷泉港实验室出版社出版的《分子克隆实验指南》一书拥有的可靠性和**性,使本书成为业内*流行、*具影响力的实验...
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分子克隆实验指南(下册)—(美)M.R.格林等主编主编贺福初主译2017.3出版

lwjxz
分子克隆实验指南(下册)—(美)M.R.格林等主编主编贺福初主译2017.3出版前言第四版前言人类和模式生物全基因组序列的获得对各领域生物学家现有的科研方式产生了深远影响。对浩瀚的基因图谱的探索需要开发多种新的实验技术和方法,传统的克隆手册必然会过时,已建立的...
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从动物肝脏中用trizol法提取RNA

曾曾曾~
跑电泳后如图,不知道这样可不可以做后续的pcr
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northern blot

123456zhan
我做了好多次northernblot每次膜都黑糊糊的,看不到带,已经把探针的浓度减小了,洗膜的时间加长了,还是不行,RNA的上样量已经达到了30ug,还是看不到带,用的罗氏CPSD显色,有没有大神有这方面的经验,求指教
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带内含子的表达质粒

weizhi111
最近要研究一个内含子的功能,有没有人用过带有内含子的表达质粒?这样我想把这段内含子替换成我自己的序列连接进去
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求个慢病毒质粒pLVX-IRES-ZsGreen1

芥末本绿
求个慢病毒质粒pLVX-IRES-ZsGreen1,有的话能否借点,不胜感激!
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求助:表达菌株的商品化感受态你们用的还好吗?

汀语言
自己的菌株染菌了,买的维地的商品化感受态BL21-CodonPlus(DE3)-RIPL,先是做的快速转化法,没长,后来问技术人员,她说不能做快速转化,只能做传统转化,用它的方法去做,两个板一个板没长另一个只长了一个单菌落。吐血。。。我就想问商品化的都这么坑吗...
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氧化石墨烯吸附DNA单链

黄豆小虫
氧化石墨烯吸附DNA单链为什么有剩余,怎么解决
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半定量pcr结果咨询,主要是溶解曲线不太看的懂

爱上走神
各位大神,最近在做半定量pcr,首先我做的是引物的扩增效率,求助各位,溶解曲线在最高峰后面有一个峰,不太明白是哪里的问题,求助各位大神!这个是该引物的溶解曲线,后面出现的两个峰是怎么回事呢?这个是该引物的扩增效率图,我做的时候用的是cDNA,模板以10倍稀释,...
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短梗霉基因组提取?

maoxuequn
最近遇到很奇怪的事情,短梗霉的基因组提取不到?不明白是为什么?是直接用索莱宝的真菌提取试剂盒提取的,前面没有液氮研磨,就直接研磨,然后提取的步骤。想问一下,是因为没有破壁还是怎样?
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酶类粉末能-20℃或-80℃储存吗?

Brownman
有个问题,为什么牛血清蛋白粉末,蛋白酶k等纯化蛋白说明书都说2-8℃保存,不是温度越低越好吗,-20℃行不行?
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过表达microRNA质粒构建

sunsarah
如何设计过表达microRNA的引物?我看一些文章为什么从ncbi上查到microRNA的基因长度为几十bp而p出来确实几百bp呢?
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烟草注射,亚细胞定位,gfp

嗯,这就是我
求问,注射了两个gfp载体,阳性对照亮,我的载体和空载没有荧光。检查载体序列,正确,已去终止密码子,且融合,求问为什么没有荧光。
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有做过基因组重复序列分析的么

wanglei8851
最近想了解下基因组重复系列那部分,看了下有几个软件,尝试了下repeatmasker和repeatexplore,还是有些疑问,有做过的希望可以请教一下
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预测靶基因(植物)

恩佐斯
请问用psRNATarget预测靶基因序列用哪个测序数据里预测的小RNA文件里有mature序列和star序列,该用哪个预测出的靶基因数据怎么看,后续该怎么分析,只用psRNATarget就行了吗还是需要其它的小白一个求助
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溶菌酶 可以用什么方法测定含量

sense连连
查到不能用考马斯亮蓝而且用紫外分光光度测误差很大
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提取麦根腐平脐蠕孢的RNA

leslieli
大哥大姐过来帮帮忙,我用Trizol法提取菌物的RNA,总是提不出来是怎么回事?
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请问eb的激发发射到底是多少?

HX91926
最近老师让做彗星实验,最后需要用荧光显微镜观察,本来是想用eb染色,因为以前都是紫外激发,没有关注过激发和发射。查了一圈,一半说是200多(紫外区)激发600发射,一半说是500(绿光区)激发600多发射。实在搞不懂应该是多少?除了eb,还有能染单链dna的染...
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启动子连接载体

du20131580
最近在做重组实验,将载体原有启动子切掉换成自己要用的启动子序列。长度大约1800bp,用的双酶切,连接转化做了好几次,LB板上有单克隆菌落,但是每次菌p的时候都没有目的条带,菌p引物用的是启动子上游和载体报告基因的下游,预计阳性条带大小为2100bp左右,做了...
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猪胃粘蛋白除菌

wangxu1017
本人做模拟胃液,用到猪胃粘蛋白Mucinporcine,但用过滤膜除菌时候怎么也按不下去,请教各位大神怎么操作可以除菌当然高压是不行的。
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求助植物Target Finder网站

恩佐斯
请问做植物TargetFinder的网站有吗
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