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关于包涵体蛋白纯化时的包涵体重悬问题

ValYu
我的纯化流程基本上是细胞破碎之后离心,用8M尿素重悬沉淀以溶解包涵体中的目标蛋白。我的问题是重悬这一步比较困难。加入8M尿素之后沉淀像胶泥一样,难以彻底打碎。可能也是这个原因,最后用尿素处理完的沉淀里依然有不少目标蛋白,影响产率。对付这种粘稠的沉淀有没有什么好...
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生物素结合位点

zzrvera
请教大家,生物素和抗生物素抗体的结合位点和生物素和链霉亲和素的结合位点一致吗?不一致的话,前者的结合位点在哪?
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磷脂在mops缓冲溶剂中 磷脂溶解不了啊,

儒墨玉婷
您好啊,我是化学专业的。我现在要做脂质体,能问您一些问题吗?我们实验室将买回来的DPhPC溶解在戊烷中我取了少量DPhPC溶液(溶剂戊烷)在真空烘箱中常温蒸干戊烷,再加hepes缓冲溶液,涡旋变成乳白色,在45度超声,有絮状物产生。没有通氮气,都怀疑氧化了,怎...
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小白救助,ELISA试剂盒模型组和正常组没有区别

sure_ayi
各位大神晚上好,我想请教一下关于elisa试剂盒的问题,我用96孔板培养巨噬细胞,培养基:DMEM+10%FBS+1%双抗,用酶免的试剂盒,因子:TNF-α和IL-6,方法是:双抗体夹心法,我做出来模型组跟正常组没有区别,然后我用纯培养基(无细胞无lps)加进...
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如果课题涉及到crispr基因编辑,至少要花多少经费呢?

我太秀了
如果课题涉及到crispr基因编辑,至少要花多少经费呢?
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双荧光素酶在miRNA验证其靶基因方面的原理是什么?

我太秀了
双荧光素酶在miRNA验证其靶基因方面的原理是什么?
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研究非编码RNA功能的方法有哪些?该如何选择?

我太秀了
研究非编码RNA功能的方法有哪些?该如何选择?
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请教!双酶切一直不成功

墨小诔
想做原核表达。TA克隆测序成功的质粒以及PET-28a载体双酶切后连接。TA克隆时连接的载体是全式金的simplecloningvetor。质粒1与pet28a是用HindIII和BamHI(takara的快切酶)。质粒2与pet28a是用NcoI和BamHI...
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放在EP管转化完的大肠杆菌在紫外灯下照俩小时

Zandraa
放在EP管里转化完的大肠杆菌在紫外灯下照俩小时,还能长出菌落吗
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【博后招聘】中国农业大学营养与健康研究院诚聘博士后

tgpb5691
平台简介中国农业大学是国家“211工程”和“985工程”重点建设的教育部直属高校,首批入寻双一流”大学。针对我国居民健康重大需求,服务“健康中国”战略及“强基计划”,培养营养与健康高端人才,中国农业大学成立了直属的营养与健康研究院。营养与健康研究院总建筑面积9...
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考染条带辨认求助

沐夕微暖
小白初次做pulldown实验,对于beads和蛋白的混合物,我直接加RIPA裂解液和loadingbuffer,然后100度煮10分钟,去跑胶,考马斯亮蓝染色,结果实验组出现了一个白色的条带,大约在150KD左右,请问大家这是什么情况呀,要怎么解决呢?
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观察动物细胞病变的显微镜推荐

fz-xyz
最近需要测试病毒滴度,求问能观察动物细胞形态和病变的显微镜。谢谢。帮忙推荐一下需要的设备参数和型号,谢谢
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蛋白质表达与纯化交流贴(含基础知识)

snoopyzxx
发一点自己总结的东西。供大家参考交流。进群可获取pdf版文件。1044518333或623496105有蛋白质表达、纯化、复性等相关问题可留言,将不定时回复。图片格式清晰...
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DNS法测定纤维素酶活的问题

TerryHLHL
我最近在测纤维素降解菌的酶活力。这些菌有做过刚果红染色的纤维素平板,是明显有水解圈的。养在cmc-na发酵培养基里也有明显的浑浊。但是取粗提酶液用DNS法测了以后是完全没有酶活,不知道是为什么。另外,DNS试剂做葡萄糖的标曲也碰到了问题:加dns试剂后吸光度一...
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水相制备的zif-8分散在PBS中絮凝沉淀

13301030070
各位虫友们好,想问一下为什么我用水相常温搅拌的方法制备的zif-8,洗涤完以后可以稳定分散在水中,但在PBS中就会形成絮凝和沉淀,是什么原因呀?很困惑,在网上也没有找到和我遇到相同问题的人(应该不是我没洗干净)谢谢!
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戊二醛固定细菌

rmcqh
做细菌sem时,首先要用2.5%戊二醛固定,我想问一下各位虫友,这里说的固定是什么意思呢?是固定细菌的形貌呢还是将细菌固定在硅片等载体上呢?戊二醛固定的原理是什么呢?谢谢
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请教rescue experiment 统计学方法

JZZ3090
最近做了x基因敲除的细胞系,然后在这个细胞系中瞬时表达GFP-x基因,同时检测某表型是否回归正常水平,也就是rescueexperiment(不知道中文叫什么,援救实验吗?),现在在做显著性分析,对统计方法产生了疑问。我设计了三组实验并对其表型进行了定量1,对...
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软琼脂克隆形成试验求助~~~~

Jenny01123
请问有哪位大神做过软琼脂克隆形成试验呀,我根据步骤做了之后,养了有一个星期了,细胞没有任何变化,不知道自己哪里出问题了?实验室里也没有其他人做过,希望能和有经验的师兄师姐师弟师妹交流一下,不胜感激~~~
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关于暂停资源上传和下载以及删除旧贴的说明

fuyuandj86
(1)因涉及版权问题,目前全论坛的资源暂停上传和下载,当然这也包括生物科学版的各种资源。目前虫友们只能通过第三方网盘来分享资源了详细说明参见以下通知:'http://muchong.com/t-14588190-1'(2)近期收到一些虫友要求删除旧贴的请求,有...
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免费赠送生物信息课程

澄江
免费生物信息网上课程赠送,需要可以联系我,站内私信
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羧肽酶A究竟是什么细胞分泌出来的,是胰腺细胞吗

ringhuan
羧肽酶A羧肽酶B都说在胰腺处多,那是不是说明这些酶是胰腺细胞分泌出来的呢另外小分子能进入到囊泡中去吗,,感谢大家援手啊,新年快乐
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请问有做过多肽合成的同学吗?

贴膜贴呀贴
想自己合成一个三肽,组里之前没人做过,完全没有经验。想问下有做过多肽合成的同学吗?用的是什么方法?有什么注意的地方吗?为什么不买呢?因为老板不让买。
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关于胆固醇氧化酶的聚集沉淀问题

masterHT
最近在做一个胆固醇氧化酶的纯化方案设计,纯化倒是挺顺利的。就是洗脱后的样品容易产生聚集体。因为最后的样品需要冻干保存所以不能添加甘油抑制蛋白间聚集。虫友们有好的方法建议吗?
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请问各位大神有纯化人肌红蛋白的高手吗?想请教一下

ljj52677
最近在做人肌红蛋白的纯化,菌用的是以前的保种菌,纯化过程:破菌——过DEAE柱(试过kpi(pH=7),tris(pH=8.5)常常要过两次才澄清,阳离子柱试过pH6,6.5挂不住)——过凝胶色谱柱G75,样品纯度可以达到4.5-5.0,但是去做质谱总是会有分...
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BI的血清怎么样?

yuanyuanwen
各位大佬,有没有用过BI的血清啊,稳不稳定,现在买gibco的血清周期都太长了,联系到一个经销商说BI血清有现货,但是不知道这个血清咋样,还有就是大家有没有用过moregate这个牌子的血清啊?
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未纯化PCR能直接转化测序么

454278916
200bp左右序列,单条带,很亮,连接转化后蓝白筛选,白斑篮斑都有,挑选了10个左右白斑测序,测序结果都是空的,是不是这样做转不进去呢
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细胞生物实验,动物实验指导

游如海豚
本人是上海市大学药理学毕业博士,擅长各种生物细胞学(细胞培养,原代细胞分离,质粒转染,基因敲除,细胞流式,分子克隆等实验)和动物类基础实验(灌胃,采血,尾静脉注射,常规疾病造模等)。才来到小木虫论坛,希望通过所学知识给大家带来帮助(我专业主攻肝脏方向,这方面的...
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HYM-study
内容已下线[LasteditedbyHYM-studyon2021-3-1at14:29]
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怎么分离提取细胞膜

夏至已远
小弟需要提取细胞膜,不知道怎么分离各种成分,求大神指教
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