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求助关于Sephadex G-100纯化的问题

作者 予浓123
来源: 小木虫 350 7 举报帖子
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求助各位大神,本人现在用Sephadex G-100纯化糖蛋白,刚开始的时候,柱子平衡好之后第一次过柱子峰形正常,第二次跑的峰形就出现杂峰峰形,于是每次灌柱后只跑一次。现在灌好柱子后柱子下出口放低出水,一旦抬高放到收集器上就不怎么流,达不到接收测量的量,不知道问题出现在哪里,希望各位指点一下,感激不尽 返回小木虫查看更多

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  • 精华评论
  • fuyuandj86

    这个树脂应该是可以重复用的,不用每次都灌柱,可以试着用NaOH溶液清洗一下。
    关于柱子不流,你是靠重力让流动相流动,还是通过泵施加了压力?如果纯粹靠重力的话,出口管路抬得太高当然就流不出来了,为啥不把接收器放在下面呢?

  • 予浓123

    引用回帖:
    2楼: Originally posted by fuyuandj86 at 2021-06-29 09:41:44
    这个树脂应该是可以重复用的,不用每次都灌柱,可以试着用NaOH溶液清洗一下。
    关于柱子不流,你是靠重力让流动相流动,还是通过泵施加了压力?如果纯粹靠重力的话,出口管路抬得太高当然就流不出来了,为啥不把接收 ...

    谢谢你的回复,很感谢,我加了个蠕动泵为了可以自动走流动相,难道不是通过泵调流速吗?什么时候要考虑接收器的位置呢?接收器目前和其他仪器一样放在试验台上

  • fuyuandj86

    引用回帖:
    3楼: Originally posted by 予浓123 at 2021-06-29 19:23:57
    谢谢你的回复,很感谢,我加了个蠕动泵为了可以自动走流动相,难道不是通过泵调流速吗?什么时候要考虑接收器的位置呢?接收器目前和其他仪器一样放在试验台上...

    不太理解你用的体系是什么样子。建议要么连用hplc,用hplc的高压泵。要么就简易的方法,填个开放式的小柱子竖着放,靠重力让液体留下来。
    hplc高压蠕动泵压力足够高的话,总归是能流的呀。除非你的柱子堵了,那就要用NaOH等清洗,保存柱子的时候用20%乙醇,防止里面长菌。

  • 予浓123

    引用回帖:
    4楼: Originally posted by fuyuandj86 at 2021-06-29 20:14:47
    不太理解你用的体系是什么样子。建议要么连用hplc,用hplc的高压泵。要么就简易的方法,填个开放式的小柱子竖着放,靠重力让液体留下来。
    hplc高压蠕动泵压力足够高的话,总归是能流的呀。除非你的柱子堵了,那就 ...

    链接: https://pan.baidu.com/s/1URQcfk5WHERXQxxdcNbJ0Q 提取码: mp4c 复制这段内容后打开百度网盘手机App,操作更方便哦
    装置是这样的,麻烦您帮我康康,谢谢您

  • fuyuandj86

    引用回帖:
    5楼: Originally posted by 予浓123 at 2021-06-29 22:39:38
    链接: https://pan.baidu.com/s/1URQcfk5WHERXQxxdcNbJ0Q 提取码: mp4c 复制这段内容后打开百度网盘手机App,操作更方便哦
    装置是这样的,麻烦您帮我康康,谢谢您...

    目测你用的这个蠕动泵是那种劲儿比较小的,压力不太够用。但是靠重力应该是可以流下来的,只要你把上液面和下面出口的垂直距离设置得足够高,P=ρgh,压强就是和两个液面垂直距离成正比。你现在液体的入口和出口都摆在桌子上处于同一水平面,所以自然就没压力了。找个架子把进样buffer的瓶子放在最上面,然后把接收器放地上。
    这种树脂就是流得比较慢,流速能到0.5ml/min就够用了。

  • walking dead

    我只能说这个胶很软,不好装柱,反压也挺大

  • 予浓123

    引用回帖:
    7楼: Originally posted by walking dead at 2021-06-30 16:40:28
    我只能说这个胶很软,不好装柱,反压也挺大

    同感哈哈

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