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【实验经验分享】MAFLD 肝细胞体外造模｜棕榈酸钠 / 油酸钠 PO 混合模型（CTM IF7.9）
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最近在做肝细胞脂质蓄积模型，翻到一篇 clinical and translational medicine（if=7.9）的文章，用棕榈酸钠 + 油酸钠（po 混合物）在三种肝细胞上构建 mafld 体外模型，方案写得比较细，分享给大家参考。 **一、研究背景简述** 这篇文章围绕 lncrna snhg5 在 mafld 中的作用展开，发现 snhg5 通过下调 mct1、影响乳酸转运，进而促进 arid1a k391 位点乳酰化，最终推动脂质沉积。体内外模型做得很完整，其中体外部分用了三种肝细胞：小鼠原代肝细胞、aml12 小鼠肝细胞系、thle-2 人肝上皮细胞。 **二、po 混合物造模方案（核心）** 文章用的是棕榈酸钠（pa）+ 油酸钠（oa）联合处理，而非单一脂肪酸。理由是：棕榈酸钠偏向诱导细胞损伤和炎症，油酸钠偏向诱导脂质沉积，两者联合更接近体内混合脂肪酸暴露的真实状态。 **工作浓度：** - 棕榈酸钠终浓度：0.25 mmol/l - 油酸钠终浓度：0.5 mmol/l（po 比例约 1:2） **配制方法：** 母液浓度分别为 6 mmol/l 棕榈酸钠、12 mmol/l 油酸钠。按以下比例加入完全培养基： - 1 份棕榈酸钠母液 + 1 份油酸钠母液 + 22 份完全培养基 - 即总体稀释 24 倍，混匀后直接加给细胞 举例：配 1.2 ml 工作液，各加 0.05 ml 母液，补完全培养基至 1.2 ml 即可。 **处理时间：** 一般 24╟48 h，建议镜下观察细胞状态和脂滴形成情况来定收获时间。 **三、造模效果验证指标** 文章中检测了以下指标来确认模型是否成功： - 油红 o 染色 / 尼罗红染色：观察脂滴蓄积 - 细胞内甘油三酯（tg）定量 - 培养上清 ast、alt：评估肝损伤 - srebp1、fasn、acc 等脂合成基因（qpcr + wb） po 处理后，三种细胞均出现明显脂滴增多、tg 升高、ast/alt 上升，脂合成基因表达上调，模型重复性较好。 **四、实操体会** 自己之前用单一组分棕榈酸钠造模，经常遇到两个问题：一是常温下容易析出，每次都要加热助溶，批次之间状态不一致；二是浓度高了细胞直接飘了，浓度低了脂滴又不够。用 pa+oa 联合之后，脂质蓄积表型更稳定，细胞状态也比单用 pa 温和不少。 文章中使用的是预制的无菌脂肪酸混合液，不用自己加热配母液，常温放置和反复冻融都不容易析出，浓度也准。做机制研究需要稳定重复表型的同学可以留意这类预制试剂，自己配母液确实容易踩坑。 li x, et al. role of lncsnhg5 in mafld: mechanisms of arid1a k391 lactylation and lipid accumulation. clin transl med. 2026;16 (7). doi：[https://doi.org/10.1002/ctm2.707 ... 10.1002/ctm2.70740)[/url] 有造模相关疑问可站内私信交流。  |
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