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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » 求助关于Sephadex G-100纯化的问题
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予浓123

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助关于Sephadex G-100纯化的问题 已有2人参与

求助各位大神，本人现在用Sephadex G-100纯化糖蛋白，刚开始的时候，柱子平衡好之后第一次过柱子峰形正常，第二次跑的峰形就出现杂峰峰形，于是每次灌柱后只跑一次。现在灌好柱子后柱子下出口放低出水，一旦抬高放到收集器上就不怎么流，达不到接收测量的量，不知道问题出现在哪里，希望各位指点一下，感激不尽
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1楼 2021-06-29 09:25:12
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fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲，勿施于人

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这个树脂应该是可以重复用的，不用每次都灌柱，可以试着用NaOH溶液清洗一下。
关于柱子不流，你是靠重力让流动相流动，还是通过泵施加了压力？如果纯粹靠重力的话，出口管路抬得太高当然就流不出来了，为啥不把接收器放在下面呢？
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The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
2楼2021-06-29 09:41:44
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予浓123

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by fuyuandj86 at 2021-06-29 09:41:44
这个树脂应该是可以重复用的，不用每次都灌柱，可以试着用NaOH溶液清洗一下。
关于柱子不流，你是靠重力让流动相流动，还是通过泵施加了压力？如果纯粹靠重力的话，出口管路抬得太高当然就流不出来了，为啥不把接收 ...

谢谢你的回复，很感谢，我加了个蠕动泵为了可以自动走流动相，难道不是通过泵调流速吗？什么时候要考虑接收器的位置呢？接收器目前和其他仪器一样放在试验台上
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3楼2021-06-29 19:23:57
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fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲，勿施于人
引用回帖:
3楼: Originally posted by 予浓123 at 2021-06-29 19:23:57
谢谢你的回复，很感谢，我加了个蠕动泵为了可以自动走流动相，难道不是通过泵调流速吗？什么时候要考虑接收器的位置呢？接收器目前和其他仪器一样放在试验台上...

不太理解你用的体系是什么样子。建议要么连用hplc，用hplc的高压泵。要么就简易的方法，填个开放式的小柱子竖着放，靠重力让液体留下来。
hplc高压蠕动泵压力足够高的话，总归是能流的呀。除非你的柱子堵了，那就要用NaOH等清洗，保存柱子的时候用20%乙醇，防止里面长菌。
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The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
4楼2021-06-29 20:14:47
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予浓123

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by fuyuandj86 at 2021-06-29 20:14:47
不太理解你用的体系是什么样子。建议要么连用hplc，用hplc的高压泵。要么就简易的方法，填个开放式的小柱子竖着放，靠重力让液体留下来。
hplc高压蠕动泵压力足够高的话，总归是能流的呀。除非你的柱子堵了，那就 ...

链接: https://pan.baidu.com/s/1URQcfk5WHERXQxxdcNbJ0Q 提取码: mp4c 复制这段内容后打开百度网盘手机App，操作更方便哦
装置是这样的，麻烦您帮我康康，谢谢您
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5楼2021-06-29 22:39:38
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fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲，勿施于人

【答案】应助回帖

★ ★
予浓123: 金币+2, ★有帮助, 好的，我试试，感谢您的帮助解答 2021-06-30 09:34:58
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5楼: Originally posted by 予浓123 at 2021-06-29 22:39:38
链接: https://pan.baidu.com/s/1URQcfk5WHERXQxxdcNbJ0Q 提取码: mp4c 复制这段内容后打开百度网盘手机App，操作更方便哦
装置是这样的，麻烦您帮我康康，谢谢您...

目测你用的这个蠕动泵是那种劲儿比较小的，压力不太够用。但是靠重力应该是可以流下来的，只要你把上液面和下面出口的垂直距离设置得足够高，P=ρgh，压强就是和两个液面垂直距离成正比。你现在液体的入口和出口都摆在桌子上处于同一水平面，所以自然就没压力了。找个架子把进样buffer的瓶子放在最上面，然后把接收器放地上。
这种树脂就是流得比较慢，流速能到0.5ml/min就够用了。
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The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
6楼2021-06-30 08:54:48
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walking dead

金虫 (小有名气)

填料制备和蛋白纯化专家

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我只能说这个胶很软，不好装柱，反压也挺大
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7楼2021-06-30 16:40:28
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予浓123

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by walking dead at 2021-06-30 16:40:28
我只能说这个胶很软，不好装柱，反压也挺大

同感哈哈
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8楼2021-07-02 08:27:12
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