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予浓123

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助关于Sephadex G-100纯化的问题 已有2人参与

求助各位大神,本人现在用Sephadex G-100纯化糖蛋白,刚开始的时候,柱子平衡好之后第一次过柱子峰形正常,第二次跑的峰形就出现杂峰峰形,于是每次灌柱后只跑一次。现在灌好柱子后柱子下出口放低出水,一旦抬高放到收集器上就不怎么流,达不到接收测量的量,不知道问题出现在哪里,希望各位指点一下,感激不尽
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walking dead

金虫 (小有名气)

填料制备和蛋白纯化专家


【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我只能说这个胶很软,不好装柱,反压也挺大
7楼2021-06-30 16:40:28
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fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲,勿施于人

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
这个树脂应该是可以重复用的,不用每次都灌柱,可以试着用NaOH溶液清洗一下。
关于柱子不流,你是靠重力让流动相流动,还是通过泵施加了压力?如果纯粹靠重力的话,出口管路抬得太高当然就流不出来了,为啥不把接收器放在下面呢?
The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
2楼2021-06-29 09:41:44
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予浓123

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by fuyuandj86 at 2021-06-29 09:41:44
这个树脂应该是可以重复用的,不用每次都灌柱,可以试着用NaOH溶液清洗一下。
关于柱子不流,你是靠重力让流动相流动,还是通过泵施加了压力?如果纯粹靠重力的话,出口管路抬得太高当然就流不出来了,为啥不把接收 ...

谢谢你的回复,很感谢,我加了个蠕动泵为了可以自动走流动相,难道不是通过泵调流速吗?什么时候要考虑接收器的位置呢?接收器目前和其他仪器一样放在试验台上
3楼2021-06-29 19:23:57
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fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲,勿施于人

引用回帖:
3楼: Originally posted by 予浓123 at 2021-06-29 19:23:57
谢谢你的回复,很感谢,我加了个蠕动泵为了可以自动走流动相,难道不是通过泵调流速吗?什么时候要考虑接收器的位置呢?接收器目前和其他仪器一样放在试验台上...

不太理解你用的体系是什么样子。建议要么连用hplc,用hplc的高压泵。要么就简易的方法,填个开放式的小柱子竖着放,靠重力让液体留下来。
hplc高压蠕动泵压力足够高的话,总归是能流的呀。除非你的柱子堵了,那就要用NaOH等清洗,保存柱子的时候用20%乙醇,防止里面长菌。
The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
4楼2021-06-29 20:14:47
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