最近在扩启动子。普通方法怎么都扩不出，想请教下大家怎么用overlap PcR 设计引物去扩启动子。麻烦惹 返回小木虫查看更多
查一下就知道了 https://wenku.baidu.com/view/404 ... 1-wk_sea_vip-search
可以试试用nested PCR扩增试试
首先你要去清楚一个问题，overlap PCR也是常规普通PCR，只不过中间有一步是产物延伸而已，这种情况在启动子很长扩增较困难的时候，可以先尝试短片段扩增，然后通过overlapPCR链接成一个完整的启动子。要是你自始至终短片段都扩增不出来的话，也就没法做overlap了，还有版主说的nested PCR，这是在第一轮扩增出现弥散或者杂带的情况下使用的，要是没带怎么能用nested PCR呢，回答问题要有基本事实为依据，不要困扰其他人，
返回小木虫查看更多
京公网安备 11010802022153号
查一下就知道了 https://wenku.baidu.com/view/404 ... 1-wk_sea_vip-search
可以试试用nested PCR扩增试试
首先你要去清楚一个问题，overlap PCR也是常规普通PCR，只不过中间有一步是产物延伸而已，这种情况在启动子很长扩增较困难的时候，可以先尝试短片段扩增，然后通过overlapPCR链接成一个完整的启动子。要是你自始至终短片段都扩增不出来的话，也就没法做overlap了，还有版主说的nested PCR，这是在第一轮扩增出现弥散或者杂带的情况下使用的，要是没带怎么能用nested PCR呢，回答问题要有基本事实为依据，不要困扰其他人，