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分子克隆问题求助 已有9人参与
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各位同仁：大家好，咨询一个问题。做分子克隆，载体与片段连接后（室温1小时）加入感受态dh5α，冰上30分钟，然后42热激1分钟，37℃，260转摇35分钟，然后离心涂板，过夜长成这个吊样，以前做的都长得挺好，只是这两天问题百出，求分析原因啊，必有重谢。ps：①为了排除涂板问题的干扰，一个是用磁珠涂布的，一个没有磁珠涂板 ②为了排除质粒问题，做了一个其他质粒的control。③板子为amp抗性，和我一起做实验的一些人都能长得很好。跪求！！  C4639360E0FF7D032EFF9C65B19D48DB.jpg  DD6DB14F5CD252ECE0D12A74CF958234.jpg |
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yilberg
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3楼2015-12-27 09:32:41
siriusxuan
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4楼2015-12-27 11:31:36
yilberg
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我是这样做的：冰上30min，42度90s，冰上5min，然后过夜，220rpm/min 37度 4小时。离心，涂板，没出现过你这种情况。dh5a 是用的takara 发自小木虫IOS客户端 |
2楼2015-12-27 09:30:56
科学小覃
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5楼2015-12-27 12:38:59
6楼2015-12-27 14:26:28
【答案】应助回帖
感谢参与，应助指数 +1
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你再看下说明书，你应该少了一步，冰上冷激5分钟。一般是冰浴30分钟，42度水浴60秒，冰浴5分钟，37度，180转，1小时。完后，选取适当量菌液涂板 发自小木虫Android客户端 |
7楼2015-12-27 14:26:57
8楼2015-12-27 14:29:17
9楼2015-12-27 14:35:33
ocean_of_yu
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Cool
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【答案】应助回帖
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胡程: 金币+2, ★有帮助, 期待回帖 2015-12-27 15:44:15
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胡程: 金币+2, ★有帮助, 期待回帖 2015-12-27 15:44:15
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照片不清楚，不知道你上面有没有单菌落，是长成一片了，还是根本没有。 发自小木虫Android客户端 |
10楼2015-12-27 15:04:39