| 查看: 2262 | 回复: 47 | ||
[求助]
分子克隆问题求助 已有9人参与
|
||
|
各位同仁：大家好，咨询一个问题。做分子克隆，载体与片段连接后（室温1小时）加入感受态dh5α，冰上30分钟，然后42热激1分钟，37℃，260转摇35分钟，然后离心涂板，过夜长成这个吊样，以前做的都长得挺好，只是这两天问题百出，求分析原因啊，必有重谢。ps：①为了排除涂板问题的干扰，一个是用磁珠涂布的，一个没有磁珠涂板 ②为了排除质粒问题，做了一个其他质粒的control。③板子为amp抗性，和我一起做实验的一些人都能长得很好。跪求！！  C4639360E0FF7D032EFF9C65B19D48DB.jpg  DD6DB14F5CD252ECE0D12A74CF958234.jpg |
回复此楼» 猜你喜欢
推荐一些20种氨基酸检测的实际应用案例
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有80人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 菌液PCR无阳性条带求助！
已经有7人回复
- 长片段克隆用invitrogen公司试剂盒问题求助
已经有6人回复
- 分子克隆效率求助！！各种载体构建
已经有8人回复
- 做材料的转入分子生物学做克隆的纠结，该继续么
已经有32人回复
- PCR特异性问题求助
已经有10人回复
- 单分子克隆实验问题求助。
已经有9人回复
- 实验要做基因克隆，本人零基础，真诚求助!
已经有5人回复
- 求助分子克隆问题——挑不出阳性克隆！
已经有14人回复
- 分子生物学真题求助
已经有1人回复
- 求助，求助，分子基础知识
已经有8人回复
- 重金求助基因克隆与功能验证方向 中文摘要350字左右翻译成英语 急！ 急！ 急！在线等
已经有3人回复
- 关于抗人IgG4 的单克隆抗体制备问题
已经有2人回复
- 【求助/交流】分子克隆 双tag
已经有3人回复
- 求助GenBank提交序列遇到的棘手问题
已经有2人回复
- 【求助/交流】关于分子克隆的技术问题，很纠结！
已经有7人回复
- 【求助/交流】急！克隆快做了一个月了，就是做不出来
已经有24人回复
- 【求助/交流】求助关于分子克隆中的连接问题
已经有2人回复
- 【求助】环境样品的分子克隆
已经有0人回复
- 【求助/交流】环境样品的分子克隆
已经有0人回复
- 【求助/交流】求助分子克隆问题
已经有5人回复
- 【求助/交流】有关蛋白纯化及其基因克隆的问题！请大家帮助！
已经有10人回复
- 【求助/交流】大量金币感谢，基因克隆表达。
已经有14人回复
yilberg
新虫 (小有名气)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 851.7
- 散金: 61
- 帖子: 71
- 在线: 8.2小时
- 虫号: 3433143
- 注册: 2014-09-22
- 性别: GG
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
3楼2015-12-27 09:32:41
siriusxuan
木虫 (正式写手)
- 应助: 50 (小学生)
- 金币: 1830
- 散金: 207
- 红花: 7
- 帖子: 509
- 在线: 151.5小时
- 虫号: 1992629
- 注册: 2012-09-11
- 专业: 生物化学
4楼2015-12-27 11:31:36
yilberg
新虫 (小有名气)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 851.7
- 散金: 61
- 帖子: 71
- 在线: 8.2小时
- 虫号: 3433143
- 注册: 2014-09-22
- 性别: GG
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
|
我是这样做的：冰上30min，42度90s，冰上5min，然后过夜，220rpm/min 37度 4小时。离心，涂板，没出现过你这种情况。dh5a 是用的takara 发自小木虫IOS客户端 |
2楼2015-12-27 09:30:56
科学小覃
木虫 (正式写手)
- 应助: 43 (小学生)
- 金币: 2426.9
- 散金: 100
- 红花: 8
- 帖子: 725
- 在线: 86.1小时
- 虫号: 3126634
- 注册: 2014-04-10
- 性别: GG
- 专业: 生物大分子结构与功能
5楼2015-12-27 12:38:59
6楼2015-12-27 14:26:28
【答案】应助回帖
感谢参与，应助指数 +1
|
你再看下说明书，你应该少了一步，冰上冷激5分钟。一般是冰浴30分钟，42度水浴60秒，冰浴5分钟，37度，180转，1小时。完后，选取适当量菌液涂板 发自小木虫Android客户端 |
7楼2015-12-27 14:26:57
8楼2015-12-27 14:29:17
9楼2015-12-27 14:35:33
ocean_of_yu
木虫 (正式写手)
Cool
- 应助: 9 (幼儿园)
- 金币: 3003.2
- 散金: 526
- 红花: 3
- 帖子: 334
- 在线: 198小时
- 虫号: 2619614
- 注册: 2013-08-27
- 专业: 细胞信号转导
【答案】应助回帖
★ ★
感谢参与，应助指数 +1
胡程: 金币+2, ★有帮助, 期待回帖 2015-12-27 15:44:15
感谢参与，应助指数 +1
胡程: 金币+2, ★有帮助, 期待回帖 2015-12-27 15:44:15
|
照片不清楚，不知道你上面有没有单菌落，是长成一片了，还是根本没有。 发自小木虫Android客户端 |
10楼2015-12-27 15:04:39
10