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金虫 (初入文坛)

21楼2015-12-27 23:48:09
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lj2013601157

新虫 (正式写手)

22楼2015-12-27 23:55:01
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zhiyin8028

金虫 (初入文坛)

正常应该是菌落,你这个可能是氨苄失效了。换别人做成功的板子用,或者自己从新倒板。也可能是你热激后加的液体培养基污染了,换成新配置的,或者借别人的无污染的

发自小木虫Android客户端
23楼2015-12-27 23:56:43
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elric

新虫 (著名写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 胡程 at 2015-12-27 14:26:28
amp应该没问题,师兄和我同时做的,他的能长。...

你涂布前一步,有离心操作,好像是不需要的。平板上可能是菌太浓了,你不要离心,直接取10ul涂布试试
24楼2015-12-28 03:27:04
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elric

新虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
引用回帖:
8楼: Originally posted by 胡程 at 2015-12-27 14:29:17
是这样的,就是整个板子留下的是涂板印记,正常来说不会有涂板印记,他也应该不是长满的杂菌,因为继续培养不会长大。期待交流...

那会不会是感受态细胞问题?连接问题也可能?只要做好对照,就可以找出问题了。感受态问题,看看其他人用同批次感受态,结果如何?连接问题,你可以直接用载体plasmid转一下试试。
25楼2015-12-28 03:29:25
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科学小覃

木虫 (正式写手)

引用回帖:
8楼: Originally posted by 胡程 at 2015-12-27 14:29:17
是这样的,就是整个板子留下的是涂板印记,正常来说不会有涂板印记,他也应该不是长满的杂菌,因为继续培养不会长大。期待交流...

是涂板不均匀吧,我都是用涂布器涂的。不过要是以前没出现过这种显现,那只能说平板出问题了。
生物科学
26楼2015-12-28 08:15:51
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heianduck

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
胡程: 金币+2, 不成敬意,感谢您的回答 2015-12-29 11:17:15
我连接一般连两个小时以上,转化冰浴30min ,42热击90s,再冰浴3min,之后240转摇90~120min,平板本身要吹干,培养12~15h,都没问题
27楼2015-12-28 08:21:17
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zht930528

木虫 (正式写手)

麻辣王子

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
胡程: 金币+2, 谢谢参与,不成敬意,辛苦了 2015-12-29 11:19:04
说下我们这里的操作,之前的都一样,然后42℃热激90s  ,之后是有一个5min的冰浴的,然后再加无抗LB复苏40min-60min。之后离心涂板。建议检查amp。感觉像是抗生素失效。或者菌液复苏导致浓度过高
麻辣王子不爱做实验
28楼2015-12-28 11:49:48
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胡程

银虫 (小有名气)

引用回帖:
17楼: Originally posted by siriusxuan at 2015-12-27 20:32:46
AMP是按照板子上的固体LB的量来加的,之前有很多新来的学生做出来跟你的一样,结果都是按照转化时候涂板的量来加抗生素。AMP的话,终浓度是60-80ug/ml的,这方面没问题的话,估计就要怀疑感受态了。...

谢谢  我也不太清楚  平板是技术员做的   一直做得出来  最近才出问题   我自己又重新做  等结果
做最好的自己
29楼2015-12-29 11:11:27
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胡程

银虫 (小有名气)

引用回帖:
18楼: Originally posted by 牧羊兰儿 at 2015-12-27 23:23:36
可能抗生素失效了,估计长出来形状就是你涂板时的大概范围,感觉涂板方式不对,不要重叠的涂,不知道你说的磁球涂板是什么,得需要灭菌过的,第二个图是对照?那你是用什么涂的作为对照
...

实验组是磁珠(就是玻璃珠在里面晃一晃,灭菌的),对照组是用手晃就是(排除磁珠污染)。谢谢,看晚了,对不住
做最好的自己
30楼2015-12-29 11:13:10
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