应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 分子克隆问题求助
483/5返回列表上一页12345下一页
查看: 2187  |  回复: 47
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

15233630604

金虫 (初入文坛)
染菌了

发自小木虫Android客户端
回复此楼
21楼2015-12-27 23:48:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lj2013601157

新虫 (正式写手)
培养基有问题吗

发自小木虫IOS客户端
回复此楼
22楼2015-12-27 23:55:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhiyin8028

金虫 (初入文坛)
正常应该是菌落，你这个可能是氨苄失效了。换别人做成功的板子用，或者自己从新倒板。也可能是你热激后加的液体培养基污染了，换成新配置的，或者借别人的无污染的

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
23楼2015-12-27 23:56:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

elric

新虫 (著名写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 胡程 at 2015-12-27 14:26:28
amp应该没问题，师兄和我同时做的，他的能长。...

你涂布前一步，有离心操作，好像是不需要的。平板上可能是菌太浓了，你不要离心，直接取10ul涂布试试
赞一下 回复此楼
24楼2015-12-28 03:27:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

elric

新虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
8楼: Originally posted by 胡程 at 2015-12-27 14:29:17
是这样的，就是整个板子留下的是涂板印记，正常来说不会有涂板印记，他也应该不是长满的杂菌，因为继续培养不会长大。期待交流...

那会不会是感受态细胞问题？连接问题也可能？只要做好对照，就可以找出问题了。感受态问题，看看其他人用同批次感受态，结果如何？连接问题，你可以直接用载体plasmid转一下试试。
赞一下 回复此楼
25楼2015-12-28 03:29:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

科学小覃

木虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 胡程 at 2015-12-27 14:29:17
是这样的，就是整个板子留下的是涂板印记，正常来说不会有涂板印记，他也应该不是长满的杂菌，因为继续培养不会长大。期待交流...

是涂板不均匀吧，我都是用涂布器涂的。不过要是以前没出现过这种显现，那只能说平板出问题了。
赞一下 回复此楼
生物科学
26楼2015-12-28 08:15:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

heianduck

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
胡程: 金币+2, 不成敬意，感谢您的回答 2015-12-29 11:17:15
我连接一般连两个小时以上，转化冰浴30min ,42热击90s，再冰浴3min，之后240转摇90~120min，平板本身要吹干，培养12~15h，都没问题
赞一下 回复此楼
27楼2015-12-28 08:21:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zht930528

木虫 (正式写手)

麻辣王子

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
胡程: 金币+2, 谢谢参与，不成敬意，辛苦了 2015-12-29 11:19:04
说下我们这里的操作，之前的都一样，然后42℃热激90s  ，之后是有一个5min的冰浴的，然后再加无抗LB复苏40min-60min。之后离心涂板。建议检查amp。感觉像是抗生素失效。或者菌液复苏导致浓度过高
赞一下 回复此楼
麻辣王子不爱做实验
28楼2015-12-28 11:49:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

胡程

银虫 (小有名气)
引用回帖:
17楼: Originally posted by siriusxuan at 2015-12-27 20:32:46
AMP是按照板子上的固体LB的量来加的，之前有很多新来的学生做出来跟你的一样，结果都是按照转化时候涂板的量来加抗生素。AMP的话，终浓度是60-80ug/ml的，这方面没问题的话，估计就要怀疑感受态了。...

谢谢  我也不太清楚  平板是技术员做的   一直做得出来  最近才出问题   我自己又重新做  等结果
赞一下 回复此楼
做最好的自己
29楼2015-12-29 11:11:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

胡程

银虫 (小有名气)
引用回帖:
18楼: Originally posted by 牧羊兰儿 at 2015-12-27 23:23:36
可能抗生素失效了，估计长出来形状就是你涂板时的大概范围，感觉涂板方式不对，不要重叠的涂，不知道你说的磁球涂板是什么，得需要灭菌过的，第二个图是对照？那你是用什么涂的作为对照
...

实验组是磁珠（就是玻璃珠在里面晃一晃，灭菌的），对照组是用手晃就是（排除磁珠污染）。谢谢，看晚了，对不住
赞一下 回复此楼
做最好的自己
30楼2015-12-29 11:13:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 胡程 的主题更新
483/5返回列表上一页12345下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭