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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 分子克隆问题求助
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胡程

银虫 (小有名气)

[求助] 分子克隆问题求助 已有9人参与

各位同仁：大家好，咨询一个问题。做分子克隆，载体与片段连接后（室温1小时）加入感受态dh5α，冰上30分钟，然后42热激1分钟，37℃，260转摇35分钟，然后离心涂板，过夜长成这个吊样，以前做的都长得挺好，只是这两天问题百出，求分析原因啊，必有重谢。ps：①为了排除涂板问题的干扰，一个是用磁珠涂布的，一个没有磁珠涂板
②为了排除质粒问题，做了一个其他质粒的control。③板子为amp抗性，和我一起做实验的一些人都能长得很好。跪求！！

分子克隆问题求助
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分子克隆问题求助-1
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做最好的自己
1楼 2015-12-27 09:21:50
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siriusxuan

木虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 胡程 at 2015-12-27 14:26:28
amp应该没问题，师兄和我同时做的，他的能长。...

AMP是按照板子上的固体LB的量来加的，之前有很多新来的学生做出来跟你的一样，结果都是按照转化时候涂板的量来加抗生素。AMP的话，终浓度是60-80ug/ml的，这方面没问题的话，估计就要怀疑感受态了。
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此座可言轻社稷，江山万里起风尘。
17楼2015-12-27 20:32:46
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yilberg

新虫 (小有名气)
我是这样做的：冰上30min，42度90s，冰上5min，然后过夜，220rpm/min 37度 4小时。离心，涂板，没出现过你这种情况。dh5a 是用的takara

发自小木虫IOS客户端
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2楼2015-12-27 09:30:56
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yilberg

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yilberg at 2015-12-27 09:30:56
我是这样做的：冰上30min，42度90s，冰上5min，然后过夜，220rpm/min 37度 4小时。离心，涂板，没出现过你这种情况。dh5a 是用的takara

过夜是连接的时候。转化不过夜的。打错了

发自小木虫IOS客户端
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3楼2015-12-27 09:32:41
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siriusxuan

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
胡程: 金币+2, ★有帮助, 谢谢，希望进一步交流分析。 2015-12-27 14:26:58
我就问你一句，AMP加了多少。
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此座可言轻社稷，江山万里起风尘。
4楼2015-12-27 11:31:36
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