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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 分子克隆问题求助
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ocean_of_yu

木虫 (正式写手)

Cool
1、你目的片段和载体的量是多少？
2、实验是否严格无菌操作？

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11楼2015-12-27 15:17:58
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胡程

银虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by wcq吴超群 at 2015-12-27 14:26:57
你再看下说明书，你应该少了一步，冰上冷激5分钟。一般是冰浴30分钟，42度水浴60秒，冰浴5分钟，37度，180转，1小时。完后，选取适当量菌液涂板

前面说了，冰上30min，再热激1min，45分钟扩增，然后离心涂板。这个没问题
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做最好的自己
12楼2015-12-27 15:42:11
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胡程

银虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by ocean_of_yu at 2015-12-27 15:04:39
照片不清楚，不知道你上面有没有单菌落，是长成一片了，还是根本没有。

我觉得应该没有，因为继续放在培养箱2天仍然老样子。我摸了一下那些印记，油油的，不知道什么鬼。
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做最好的自己
13楼2015-12-27 15:44:02
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yilberg

新虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 胡程 at 2015-12-27 14:35:33
我们感受态和板子是实验室技术员自己做的，一直在用都很正常，只是我从周四开始不行了，同时，和我一起做的师兄也能做出来，所以可以排除感受态，protocol是实验室都这么做的，相信问题不大，不过今天我又做了连接 ...

菌的话看浓度的。不一定严格4小时。我一般隔一小时看一次。浓度差不多了 就涂

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14楼2015-12-27 16:11:29
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ocean_of_yu

木虫 (正式写手)

Cool

【答案】应助回帖

引用回帖:
13楼: Originally posted by 胡程 at 2015-12-27 15:44:02
我觉得应该没有，因为继续放在培养箱2天仍然老样子。我摸了一下那些印记，油油的，不知道什么鬼。...

我之前做微生物实验筛菌时出现这种情况，可能是染了某种真菌，注意无菌操作，楼上说的热激后冰浴也很对～

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15楼2015-12-27 16:18:03
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jimsmart

捐助贵宾 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
胡程: 金币+2, 谢谢，也许吧 正在排除 2015-12-29 11:20:56
是否有可能是室内环境因素变化所致?
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16楼2015-12-27 19:14:48
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siriusxuan

木虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 胡程 at 2015-12-27 14:26:28
amp应该没问题，师兄和我同时做的，他的能长。...

AMP是按照板子上的固体LB的量来加的，之前有很多新来的学生做出来跟你的一样，结果都是按照转化时候涂板的量来加抗生素。AMP的话，终浓度是60-80ug/ml的，这方面没问题的话，估计就要怀疑感受态了。
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此座可言轻社稷，江山万里起风尘。
17楼2015-12-27 20:32:46
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牧羊兰儿

新虫 (小有名气)
可能抗生素失效了，估计长出来形状就是你涂板时的大概范围，感觉涂板方式不对，不要重叠的涂，不知道你说的磁球涂板是什么，得需要灭菌过的，第二个图是对照？那你是用什么涂的作为对照

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18楼2015-12-27 23:23:36
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自然茶

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by siriusxuan at 2015-12-27 11:31:36
我就问你一句，AMP加了多少。

amp我配制浓度是100mg/ml，等体积「一般会多加点」加到培养基，倒平板。然后涂平板。有问题吗

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19楼2015-12-27 23:36:54
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siriusxuan

木虫 (正式写手)
引用回帖:
19楼: Originally posted by 自然茶 at 2015-12-27 23:36:54
amp我配制浓度是100mg/ml，等体积「一般会多加点」加到培养基，倒平板。然后涂平板。有问题吗
...

这个应该没问题的，除非加入抗生素的时候，培养基的温度还很高。50度以上就不行了
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此座可言轻社稷，江山万里起风尘。
20楼2015-12-27 23:43:06
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