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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 分子克隆效率求助！！各种载体构建
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哈图萨斯90

铜虫 (初入文坛)

[求助] 分子克隆效率求助！！各种载体构建 已有4人参与

在做分子克隆方面的实验，无论使用传统的酶切酶连、同源重组或者Gateway的方法构建表达载体的时候，总是遇到某一段时间效率特别高，很快就能成功构建所需要的载体，但是某一段时间一点效率都没有的情况。一般来讲每年的2、3月份成功率比较高，其他时间段几乎可以说是完全失败的。这个问题已经困扰了我们很久了，实验室里的其他人也都遇到过。
希望大家多帮忙出出主意，最近很急！！！
谢谢了！！
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1楼 2014-06-23 02:47:04
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seven拂晓

新虫 (初入文坛)
妈呀 我最近也在构建 卡在酶切上了 按你这么说我得明年才做的出来了。。。

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2楼2014-06-23 09:09:44
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哈图萨斯90

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by seven拂晓 at 2014-06-23 09:09:44
妈呀 我最近也在构建 卡在酶切上了 按你这么说我得明年才做的出来了。。。

连续两年的经验啊~~
不同实验室可能会不一样吧
祝你顺利
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3楼2014-06-23 16:36:26
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thaw

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

要求送酶的干冰运输，酶一定要埋在干冰里，我们实验室遇到过后来就好了
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4楼2014-08-05 15:35:48
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BioChen

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
哈图萨斯90(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-08-06 09:25:37
“一般来讲，每年的2-3月份比较高”
请问你在这个实验室待了几年？你是怎么得出这个看法的。
或许今年2-3月份你做载体构建的时候，效率很高。去年2-3月份你也在做载体构建？前年2-3月份你还在做载体构建？

我做实验有一个原则：当实验结果阴性，看阳性对照。
也就是当实验做不出来的时候，特别是应该做得来的实验，我会设置各种对照排除原因。
酶、感受肽、质粒提取、胶回收等都是可以设计实验验证它们是否好用的。
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5楼2014-08-05 21:32:13
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wszl666

银虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

呵呵，这个跟月份好像没什么问题吧？莫非是噬菌体的污染？
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基因敲除
6楼2014-08-06 10:48:38
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)
难怪老出问题，原来如此
我一直认为实验需要天时地利人和。
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7楼2014-08-06 15:44:04
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happydove

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-08-06 16:25:06
嗯，我觉得5楼说得很好，设置阳性对照，排出外在原因。
我们一直都在做克隆，没有你说的问题。
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8楼2014-08-06 16:01:07
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yanbodr

至尊木虫 (文坛精英)
In fusion系列，可以彻底解决这些问题

发自小木虫Android客户端
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9楼2018-06-03 21:10:39
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