应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 有有效的方法检验酶切效率吗
41/1返回列表
查看: 1904  |  回复: 3
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

ruchang2013

铁虫 (初入文坛)

[求助] 有有效的方法检验酶切效率吗 已有2人参与

最近的单酶切实验一直连接不上核酸片段。载体是pTKIP-cat,单酶切位点是ApaI，核酸片段2端也设计了ApaI酶切位点。我发觉是不是载体像平末端一样容易自连，去磷酸化延长至45min也不管事.我认为若果酶切不彻底，那么导致去磷酸化等于白做，而且若是有一部分酶切成功，去磷酸化过头，那么就等于把酶切好的载体去坏了
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-05-19 09:24:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

再来一次

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-05-20 11:25:48
ruchang2013: 金币+2, ★有帮助 2014-05-22 19:03:33
加大一下载体的量，延长酶切时间。
ps：考察酶切效率，方法倒是有，不过又费事又不准确，你个简单酶切不至于这么麻烦。
pps：所有的酶其实都不像它说明书上描述的那样高效
赞一下 回复此楼
2楼2014-05-20 10:48:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

万丽丽081222

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-05-20 11:25:57
ruchang2013: 金币+3 2014-05-22 19:03:42
你酶切结束后，点上loading buffer,然后跑胶，切胶纯化后在连接。
你做这个单酶切的目的是什么啊？pTKIP-cat这个载体有什么特殊的性质吗？如果实在不行就换载体。
赞一下 回复此楼
learnenglish
3楼2014-05-20 11:16:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

再来一次

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 万丽丽081222 at 2014-05-20 11:16:57
你酶切结束后，点上loading buffer,然后跑胶，切胶纯化后在连接。
你做这个单酶切的目的是什么啊？pTKIP-cat这个载体有什么特殊的性质吗？如果实在不行就换载体。

纯化后载体回收经常容易丢失啊，妹子
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2014-05-21 14:18:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 ruchang2013 的主题更新
41/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料类求调剂 +11 wana_kiko 2026-02-28 14/700 2026-03-02 08:46 by 聪明的大松鼠
[考研] 欢迎采矿、地质、岩土、计算机、人工智能等专业的同学报考 +4 pin8023 2026-02-28 6/300 2026-03-02 06:35 by 汪！？！
[考研] 284求调剂 +8 天下熯 2026-02-28 8/400 2026-03-02 00:15 by 暮雨星晴
[考研] 265分求调剂不调专业和学校有行学上就 +6 礼堂丁真258 2026-02-28 8/400 2026-03-01 22:50 by jian_
[考研] 0856调剂 +5 刘梦微 2026-02-28 5/250 2026-03-01 22:30 by wang_dand
[考研] 275求调剂 +3 明远求学 2026-03-01 3/150 2026-03-01 22:29 by 刘兵
[硕博家园] 博士自荐 +7 科研狗111 2026-02-26 11/550 2026-03-01 22:24 by 哲平L
[考研] 272求调剂 +6 田智友 2026-02-28 6/300 2026-03-01 21:40 by 公瑾逍遥
[考研] 295求调剂 +7 19171856320 2026-02-28 7/350 2026-03-01 18:54 by 18137688336
[考研] 328求调剂 +3 aaadim 2026-03-01 5/250 2026-03-01 17:29 by njzyff
[考研] 290求调剂 +9 材料专硕调剂； 2026-02-28 11/550 2026-03-01 17:21 by sunny81
[考研] 285求调剂 +8 满头大汗的学生 2026-02-28 8/400 2026-03-01 16:47 by caszguilin
[基金申请] 刚录用，没有期刊号，但是在线可看的论文可以放为代表作吗 10+3 arang1 2026-03-01 3/150 2026-03-01 16:43 by babero
[考研] 303求调剂 +4 今夏不夏 2026-03-01 4/200 2026-03-01 14:46 by 嘟嘟小浣熊
[考研] 课题组接收材料类调剂研究生 +3 gaoxiaoniuma 2026-02-28 4/200 2026-03-01 14:30 by jjj三跨
[考研] 302材料工程求调剂 +4 Doleres 2026-03-01 5/250 2026-03-01 11:52 by liqiongjy
[硕博家园] 2025届双非化工硕士毕业，申博 +3 更多的是 2026-02-27 4/200 2026-03-01 10:04 by ztg729
[论文投稿] 求助coordination chemistry reviews 的写作模板 10+3 ljplijiapeng 2026-02-27 4/200 2026-03-01 09:07 by babero
[考研] 085600材料工程一志愿中科大总分312求调剂 +8 吃宵夜1 2026-02-28 10/500 2026-02-28 20:27 by L135790
[硕博家园] 【博士招生】太原理工大学2026化工博士 +4 N1ce_try 2026-02-24 8/400 2026-02-26 08:40 by N1ce_try
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭